论文摘要
髓母细胞瘤是一类常见于儿童的小脑恶性肿瘤,该肿瘤最常发生于510岁儿童,但是有时也会见于成年人。尽管该肿瘤的五年生存率已经达到6080%,但是髓母细胞瘤的预后仍然不乐观。人类髓母细胞瘤中常发生染色体10q的缺失,该片段缺失一般限于SHH和Group C类肿瘤,常常与肿瘤的预后不良相关。抑癌基因Pten就位于10q23.31。我们通过在Ptch1+/-小鼠背景上配入Pten杂合性缺失的小鼠,利用该小鼠模型研究Pten缺失与Shh信号通路在抑制髓母细胞瘤方面的协同作用。我们利用Nes-cre转基因小鼠,在神经系统发育过程中特异性敲除Pten。Nes-cre小鼠的驱动能力主要表现于小脑外颗粒细胞层（EGL）、伯格曼胶质细胞层和白质。Ptenfl/fl;Nes-cre小鼠由于脑部过度增殖,发生癫痫、共济失调等,在成年前已经死亡。我们有关髓母细胞瘤发生的研究重点放在Ptenfl/+;Nes-cre小鼠上。尽管Pten缺失常常发生于人类恶性脑部肿瘤中,但是失活Pten并没有小鼠脑瘤的发生,可能还需要其他遗传突变的参与。我们的研究发现,在Ptch1+/-的背景上,Pten杂合性缺失促进了髓母细胞瘤的发生,而且使髓母细胞瘤的组织类型由经典性转为促纤维增生性。在自发的髓母细胞瘤中,虽然Pten是单等位基因突变,还有一条野生型Pten等位基因存在,但是在肿瘤区域中Pten蛋白完全没有表达。于是,由于Pten表达缺失导致PI3K信号通路的活化:Akt激活形式,即丝氨酸473位点磷酸化的Akt,表达增加。而且有意思的是,我们在Ptenfl/+;Nes-cre;Ptch1+/-髓母细胞瘤中发现Shh通路激活相关的几个靶基因,包括Gli1和mycn,均被抑制。而Pten的RNA和蛋白水平均被Shh通路激活而抑制。我们通过RNA的深度测序（deep-sequence）,筛选出在Ptenfl/+;Nes-cre;Ptch1+/-髓母细胞瘤中过表达的miR-18396182簇。由于Nes-cre的表达和同源重组发生在肿瘤形成前的EGL层细胞中,并且Ptenfl/+;Nes-cre;Ptch1+/-髓母细胞瘤也是位于小脑表面,SHH亚类髓母细胞瘤都起源于EGL中的GCP细胞。GCP细胞在出生后67天的小脑中增殖最强,我们分离出P6 C57BL/6小鼠的GCP细胞,用逆转录病毒在GCP细胞中过表达miR-18396182。在含有Shh配基时mi R-18396182过表达能够显著促进GCP细胞的增殖,但是这种促进作用,只有存在Shh配基,Shh通路激活时才发生。因此我们的结果说明,mi R-18396182能够在Shh存在时促进髓母细胞瘤的发生速率,它能够扩大Shh信号通路在形成髓母细胞瘤时的效果,但并不能完全替代Shh通路的驱动作用。我们的研究从体内和体外两方面证明了,miR-18396182在Pten缺失相关的髓母细胞瘤中发挥重要作用。抑制miR-18396182簇为PI3K信号通路持续激活的髓母细胞瘤病人提出了新的治疗策略。
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标签：髓母细胞瘤论文; 通路论文; 颗粒细胞前体细胞论文;