论文题目: CD226基因表达调控的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 免疫学
作者: 菅金龙
导师: 金伯泉
关键词: 启动子,转录因子
文献来源: 第四军医大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:研究人CD226基因表达调控的规律,确定CD226基因启动子的位置,研究细胞因子、刺激剂和转录因子对其的调节作用。 方法:①从50ng/ml PMA刺激48小时的Jurkat细胞中提取mRNA,采用5′-RACE的方法经过反转录和巢式PCR确定人CD226基因的转录起始点。②从GenBank中获取CD226基因的上游调控序列,利用www.ifti.org中的转录因子扫描程序,分析可能存在的转录因子结合位点,用手工比对的方法剔除分析结果中可能存在的假阳性,筛选可能性比较大的转录因子进行功能研究。③从正常人外周血中提取基因组DNA,以GenBank中获得的序列为模板设计引物,克隆了长约2kb的CD226基因上游调控序列。在此基础上,制备了不同的截断体,连入pGL3荧光素酶报告基因表达载体,转染Jurkat细胞48小时后检测荧光素酶活性,确定CD226的启动子的位置。④将含有CD226基因启动子序列的报告基因载体转染Jurkat细胞,用50ng/ml PMA和0.5μg/ml A23187分别刺激4小时和1小时,在转染48小时后检测荧光素酶活性,观察PMA和A23187对CD226基因启动子的调控作用。⑤把两个启动子间可能存在的负调控元件(NRE)通过PCR的方法,克隆到CMV启动子的下游,DNA测序正确后将CMV-NRE
论文目录:
缩略语表
中文摘要
英文摘要
前言和文献回顾
正文
1 CD226转录起始点的确定及其上游调控序列生物信息学分析
2 CD226启动子的定位及其调节
3 转录因子AP-1和etsl对CD226启动子的调控
4 凝胶迁移实验证实转录因子与启动子的结合
小结
参考文献
附录
个人简历和研究成果
致谢
发布时间: 2005-07-19
参考文献
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