血清p53抗体检测在乳腺癌患者新辅助化疗中的临床应用研究

论文摘要

乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤之一,全球每年发病人数超过100万。资料证明,全世界乳腺癌发生率正以每年0.2%-3%的幅度上升,1992年美国乳癌发病达180000例,发病率达111.4/10万人。据统计,我国1994年乳腺癌新增病例110635例,发病率20.2/10万人,死亡27343人。目前每年因乳腺癌失去乳房或夺去生命的绝对数字都在不断上升。随着人们防癌知识的普及与提高,医学科学的进步、医疗设备的改善,乳腺的多种疾病,尤其是乳腺癌的防治工作已经取得了显著的成效。乳腺癌的预防有了新的苗头,早诊技术推陈出新,乳腺癌综合治疗效果已经有所提高。自20世纪70-80年代,大量的临床证明化疗能明显提高乳腺癌病人的生存率、改善病人的生存质量,化学药物治疗（简称化疗）是一种必要的全身性辅助治疗,它与手术治疗、放射治疗及内分泌（激素）治疗乳腺癌一样,都是不可缺少的,且具有同等重要的临床价值。化疗已成为浸润性乳腺癌的主要疗法之一。新辅助化疗目前被临床广泛应用于晚期乳腺癌的系统治疗。应用新辅助化疗,能够显著降低肿瘤分期,提高保乳手术几率。尽管乳腺癌的新辅助化疗已经在国内外临床上施行很长时间,然而对于新辅助化疗过程中一些肿瘤标志性分子的研究还有待深入,国内外学者对一些标志性分子的功能及表达规律还存在很大争议。p53抗体在肿瘤早期以及一些癌前病变即能检出,大量资料表明,p53抗体的出现在恶性肿瘤的发生过程中是一个非常早期的事件。在本实验中,我们利用基因重组技术,成功构建了带有6His纯化标签的人野生型全长p53蛋白的原核表达质粒;对工程菌表达蛋白的条件进行优化后,对p53蛋白进行了大量表达,经镍离子金属螯合亲和层析纯化处理,得到了全长p53蛋白的纯化产物;我们利用ELISA技术,对86名乳腺癌患者血清进行了检测,全长p53蛋白检测体系的特异度分别为95%。在本实验中,我们利用ELISA技术,分别以重组p53蛋白为固相包被抗原,棋盘滴定法确定了最佳包被浓度和最佳血清稀释倍数后,对400名健康人血清进行了检测,确定了各自体系的cut-off值;又对86名乳腺癌患者血清进行了检测,全长p53蛋白检测体系的特异度分别为95%。我们比较了血清p53抗体表达与临床用药之间的相关性,确定p53抗体与某些临床参数具有显著相关性。通过研究发现,血清p53抗体具有一定的预测价值,化疗前p53抗体阴性的患者对葸环类药物敏感,肿瘤应答率高,治疗效果明显。而化疗前血清p53抗体呈阳性的患者,对蒽环类药物具有抗性,治疗效果不理想。以上实验结果充分表明p53抗体在肿瘤预后方面具有显著意义。表明p53抗体在肿瘤预后方面具有显著意义。因此,开展p53抗体检测,探索肿瘤患者血清p53抗体表达与患者临床资料、肿瘤治疗方案选择以及其他肿瘤标志物表达的相关性研究,是一项非常有利于乳腺癌新辅助化疗临床治疗、用药选择和预后判断的工作。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 引言
• 1 乳腺癌
• 2 乳腺癌发病的社会因素
• 3 乳腺癌的临床病理学特点
• 3.1 乳腺癌与淋巴结转移
• 3.2 乳腺癌的TNM分期与预后评估相关性
• 4 乳腺癌的术后辅助化疗
• 4.1 乳腺癌的术后辅助化疗
• 4.2 术后辅助化疗的方案
• 5 乳腺癌的术前化疗-新辅助化疗
• 5.1 TAC方案
• 5.2 GEDoc方案
• 5.3 FEC100方案
• 5.4 局部晚期乳腺癌的术前新辅助化疗和术后预防复发或转移的辅助化疗
• 5.5 复发转移乳腺癌的解救
• 5.6 对新辅助化疗的展望
• 6 影响辅助化疗效果的因素
• 6.1 年龄大小和绝经情况
• 6.2 激素受体状况
• 6.3 淋巴结转移情况
• 6.4 是否含蒽环类药物的化疗方案
• 6.5 化疗药物的剂量
• 6.6 单药方案与联合化疗方案
• 6.7 辅助化疗开始时间的确定
• 6.8 给药的周期长度
• 7 p53生物学背景
• 7.1 p53基因
• 7.2 p53蛋白
• 7.3 p53蛋白的临床意义
• 7.4 p53抗体
• 7.5 p53抗体在肿瘤临床治疗中的应用
• 7.6 p53抗体临床应用存在的问题与展望
• 8 ELISA技术
• 8.1 ELISA技术发展史
• 8.2 ELISA原理
• 8.3 ELISA操作注意事项
• 实验材料和方法
• 1 实验材料
• 1.1 实验所需仪器设备
• 1.2 主要生化、菌株及分子生物学试剂
• 1.3 乳腺癌患者肿瘤组织标本和血清样本采集
• 2 实验方法
• 2.1 乳腺癌新辅助化疗与肿瘤标志物检测
• 2.2 统计检验
• 实验结果与分析
• 1 应用野生型全长p53蛋白检测乳腺癌患者新辅助化疗前后血清p53抗体表达情况
• 1.1 全长人野生型p53蛋白表达质粒的构建
• 1.2 基因重组p53蛋白的原核表达及产物鉴定
• 1.3 目的蛋白表达区间分析及纯化
• 1.4 目的蛋白Western blot分析
• 1.5 肿瘤患者血清与p53蛋白的免疫杂交分析
• 2 以全长蛋白为固相抗原对血清p53抗体的检测
• 2.1 以全长蛋白为固相抗原的ELISA条件的确定
• 2.2 乳腺癌患者的选择及患者血清p53抗体含量的测定
• 2.3 乳腺癌患者血清p53抗体,CEA,CA15-3,ER,PR和HER-2检测结果
• 2.4 乳腺癌患者新辅助化疗OR率和NR率统计
• 2.5 化疗前血清p53抗体,CEA,CA15-3,ER,PR和HER-2表达量与化疗后OR率的相关性
• 讨论
• 1 重组人野生型p53蛋白的表达与纯化
• 2 全长p53蛋白免疫原性研究
• 3 血清p53抗体检测
• 3.1 ELISA实验
• 3.2 p53系数的确定
• 4 血清p53抗体的检测与化疗的相关性
• 4.1 p53抗体与肿瘤耐药性
• 4.2 血清p53抗体表达与新辅助化疗OR和NR相关性分析
• 结论
• 创新点
• 参考文献
• 致谢
• 在学期间公开发表论文及著作情况
• 在学期间参加课题和项目情况