新型DNA聚合酶的基因工程改造及应用研究

论文题目: 新型DNA聚合酶的基因工程改造及应用研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物化学与分子生物学

作者: 盛彦敏

导师: 李彦舫

关键词: 聚合酶链式反应,聚合酶,基因工程,聚合酶基因,融合基因,重组酶

文献来源: 吉林大学

发表年度: 2005

论文摘要: 聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction PCR)是一种模拟DNA聚合酶在体内的催化作用,在体外快速扩增特定DNA片段的技术,是现代分子生物学最重要的手段之一。1985年美国Cetus公司人类遗传部的KaryMullis等利用Klenow DNA聚合酶建立了该项技术。此项技术一经问世就因其操作简便、快速、灵敏度高、特异性强和对样品的耐受性好等优点迅速在与生物学相关的学科领域得到广泛应用,并不断发展和完善。 聚合酶链式反应存在扩增产物的忠实性和可扩增产物的大小两个主要限制因素,二者均对PCR效率有较大的影响,而影响上述两因素的关键是催化PCR反应的聚合酶。 早期应用于PCR的DNA聚合酶是Klenow片段,其缺点是在60℃时很快就失活,故每一轮PCR都需要追加Klenow DNA聚合酶,使PCR过程繁琐而复杂,因而限制了PCR技术的发展。 Taq DNA聚合酶是第一个应用于PCR技术的热稳定DNA聚合酶,该酶的引入使得PCR过程实现了自动化,但是Taq酶的一个重要缺陷是没有3′-5′核酸外切酶活性,在PCR反应过程中不能切除错误参入的单核苷酸,故不能很好保证其扩增产物的忠实性。 在发现Taq DNA聚合酶之后,人们又陆续发现了Vent、Deep、Pfu、

论文目录:

前言

第一篇 文献综述

第一章 聚合酶链式反应的研究进展与现状

1.1 聚合酶链式反应的建立

1.2 聚合酶链式反应的原理及特点

1.3 聚合酶链式反应的体系组成及实验条件的优化

1.3.1 反应液组分的优化

1.3.2 反应条件的优化

1.4 聚合酶链式反应的发展和应用

1.4.1 PCR衍生技术

1.4.2 PCR技术的应用

第二章 DNA聚合酶研究的现状和意义

2.1 DNA聚合酶的分类

2.2 耐热DNA聚合酶的功能特性

2.3 DNA聚合酶研究历史与现状

2.4 耐热DNA聚合酶研究意义

2.5 本研究创新之处

第二篇 研究内容

第一章 DNA聚合酶基因的基因工程改造及在大肠杆菌中的高效表

1.1 材料与方法

1.1.1 材料

1.1.2 方法

1.2 结果

1.2.1 Tgo酶基因的克隆及基因工程改造

1.2.2 重组Tgo酶在大肠杆菌中的高效表达和纯化

1.3 讨论

1.4 小结

第二章 重组Tgo DNA聚合酶PCR扩增方案的

2.1 材料与方法

2.1.1 材料

2.1.2 方法

2.2 结果

2.2.1 重组Tgo DNA聚合酶PCR反应缓冲液的组成及优化

2.2.2 重组Tgo DNA聚合酶的最适延伸温度

2.2.3 重组Tgo DNA聚合酶的PCR反应方案

2.3 讨论

2.4 小结

第三章 重组Tgo DNA聚合酶的特性

3.1 材料与方法

3.1.1 材料

3.1.2 方法

3.2 结果

3.2.1 重组Tgo酶的PCR扩增性能

3.2.2 重组Tgo酶的扩增忠实性

3.2.3 重组Tgo酶的耐高温性

3.2.4 重组Tgo酶的长链PCR扩增

3.3 讨论

3.4 小结

结论

参考文献

攻博期间成果

中文摘要

ABSTRACT

致谢

导师简介

作者简介

发布时间: 2005-08-26

参考文献

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