小鼠着床位点基因表达系列分析

论文摘要

胚胎着床涉及胚胎和子宫之间一系列复杂的相互作用,许多基因参与其中。尽管已利用寡核苷酸芯片、cDNA芯片、DDRT-PCR等各种不同的技术筛选到一些着床相关基因,但胚胎着床的机制仍不清楚。为了全面了解胚胎着床相关分子和发现新的胚胎着床相关信号通路,我们首次应用基因表达系列分析（SAGE）技术,分析了小鼠早期妊娠第五天非着床位点和着床位点子宫的基因表达谱。我们利用早期妊娠小鼠第五天的子宫分别构建了非着床位点和着床位点标签长10 bp的两个SAGE文库,非着床位点测序的标签数为51306个,对应16964个特异标签,着床位点测序的标签数为53214个,对应16733个特异的标签。为了提高SAGE库中标签对应基因的比例,我们利用同一个SAGE文库的序列文件,构建了标签长11 bp的两个文库,非着床位点的标签总数为48121,对应16677个特异标签,着床位点的标签总数为50227,对应16696个特异的标签。共有1039个标签在非着床位点特异性表达,1252个标签在着床位点特异性表达。根据p值,195个标签在非着床位点显著上调,其中100个标签是单一匹配的,261个标签在着床位点显著上调,其中127个是单一匹配的。为了验证SAGE结果的可信性,我们随机选取14个单一匹配的标签对应的基因（其中7个在着床位点上调,7个下调）进行RT-PCR验证,所有这些基因的RT-PCR结果与SAGE结果中的表达趋势一致。我们利用原位杂交对SAGE结果也进行了验证。与非着床位点相比,1810014L12Rik、Psmb5、Cd63、Npm1、Fads3和Tagln2在着床位点处的腔上皮下基质细胞中高表达。Ddx39在第5天着床位点腔上皮下基质中强表达,在非着床位点及假孕第5天未检测到杂交信号。利用假孕及延迟着床模型发现,Ddx39的表达受正在着床的活性胚泡的诱导。在卵巢切除的小鼠中,Ddx39的表达受雌激素显著上调,孕酮对Ddx39的表达没有明显影响。这表明Ddx39可能在胚胎着床过程中发挥重要作用。总之,我们成功地构建了早期妊娠小鼠第5天子宫的非着床位点和着床位点两个SAGE文库,筛选得到了一批与胚胎着床相关的基因,为进一步研究胚胎着床的分子机理提供了大量有价值的信息。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 胚胎着床研究进展
• 1.2 鉴定胚胎着床相关基因表达的研究方法
• 1.3 本研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 实验动物模型
• 2.3 基因表达系列分析
• 2.4 RACE
• 2.5 原位杂交
• 2.6 RT-PCR
• 3 结果与分析
• 3.1 SAGE 文库的构建和分析
• 3.2 RACE 结果
• 3.3 显著变化基因的功能分类
• 3.4 RT-PCR 验证结果
• 3.5 SAGE 结果的原位杂交验证
• 4 讨论
• 4.1 SAGE 文库的分析与比较
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读博士学位期间发表论文