Yippee转基因果蝇品系的建立及基因功能的初步研究

论文摘要

心脏发育是一个错综复杂的过程,在分子机理上被一套进化上保守的转录因子（NK2、MEF2、GATA、Tbx和Hand等）控制,它们决定心脏细胞的发育方向,决定了编码收缩蛋白基因的表达和心脏结构形态的建成。同时,它们在神经发生、心肌细胞发生、血细胞发生和癌细胞发生过程中也发挥着重要的调节作用。本文研究的Yippee基因编码一个高度保守序列的锌指结合蛋白,从真菌到人类的68种真核生物中都发现了它的同源蛋白。Yippee在果蝇发育的不同阶段以及在人类胎儿的不同组织中广泛表达,提示Yippee可能具有重要的生物学功能。2003年,通过酵母双杂交作用绘制的果蝇蛋白相互作用图谱显示,Yippee基因通过CG15676基因与心脏发育相关基因Wg、Mef2等有联系,即Yippee基因可能影响心脏发育调控基因的信号途径,故推测Yippee可能与心脏发育相关。我们采用RT-PCR的方法扩增果蝇Yippee基因cDNA,构建pUAS-Yippee-IRES-GFP绿色荧光过表达质粒,再通过果蝇胚胎显微注射和mini-white标记基因筛选建立了转基因果蝇品系。将该转基因品系与Hand-GAL4杂交、RNA干扰品系分别与Hand-GFP品系杂交,在荧光显微镜下观察杂交后代的心管和淋巴腺的表型改变,以期来确定Yippee基因在心脏发育调控中的可能作用

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 引言和文献综述
• 第一节 果蝇心脏发育
• 一、果蝇心脏结构与发育的胚胎学
• 二、果蝇心脏发育的基因调控
• 第二节 利用果蝇模型研究脊椎动物心脏发育信号调控
• 第三节 转基因果蝇模型的建立
• 第四节 Yippee基因及其与心脏发育的潜在功能推测
• 第五节 课题研究意义
• 第二章 材料与方法
• 第一节 材料
• 第二节 方法
• 一、Yippee基因的获得
• 二、转基因果蝇载体pUAS-Yippee-IRES-GFP的构建、检测及质粒大提
• 三、果蝇胚胎显微注射
• 四、转基因果蝇的筛选、平衡、定位以及PCR验证
• 五、果蝇品系的杂交及杂交后代的观察
• 第三章 结果与分析
• 一、Yippee的全长cDNA、编码区及其编码蛋白的分析
• 二、Yippee蛋白与其他物种同源蛋白的同源性比较及进化保守性分析
• 三、pUAS-Yippee-IRES-GFP质粒构建的结果与分析
• 四、胚胎显微注射结果及P转座子插入位点平衡定位分析
• 五、转基因果蝇的PCR验证及其结果与分析
• 六、果蝇品系的杂交及杂交后代观察的结果与分析
• 第四章 讨论
• 一、实验方法
• 二、Yippee基因对果蝇心脏发育和果蝇淋巴腺发育的影响及其潜在的功能
• 参考文献
• 附录
• 致谢