传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）和桃拉综合症病毒（TSV）的分子流行病学研究

论文摘要

南美白对虾是中国对虾养殖的一个重要品种。传染性皮下及造血组织坏死病毒（Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus，IHHNV）和桃拉综合症病毒（Taura Syndrome Virus，TSV）是对虾疾病的两种主要的病毒病原，给对虾养殖业带来了严重的经济损失。我们采集了来自中国七个不同地区的214份南美白对虾样品，采用PCR或RT-PCR的方法分别检测了IHHNV和TSV。检测结果表明样品中IHHNV阳性率为65.42％，而TSV为3.27％。并且有少数样品能同时被这两种病毒感染，揭示这两种病毒能共存于同一只宿主中。随后，我们选取七个地区的IHHNV阳性样品进行基因组片段的扩增，扩增片段长3065个核苷酸，包含病毒非结构蛋白基因和衣壳蛋白基因。与IHHNV原始参考毒株夏威夷株的基因组序列比对结果表明，这七株序列的变异率很低，与夏威夷株核苷酸相似性可达99.3％到99.9％，并且衣壳蛋白基因的核苷酸突变率（1.92％）高于非结构蛋白基因（1.00％）。突变位点在整个病毒基因组上呈现无规则的散状分布。同样的，我们选取了三个地区TSV阳性样品进行了结构蛋白基因片段扩增和测序。结合GenBank公布的序列，利用病毒的结构蛋白基因进行了聚类分析，结果显示TSV能明显分为两组（亚洲组和美洲组），显示出显著的地域差别。另外，与IHHNV不同的是，TSV结构蛋白基因的变异位点集中于VP1区，且变异位点呈现明显规律性，可作为基因分型的依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 第一章 文献综述
• 第一节 南美白对虾及其病害
• 1.1 南美白对虾
• 1.2 主要病毒病害
• 第二节 传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）研究综述
• 2.1 IHHNV分类地位、地理分布及宿主范围
• 2.2 IHHNV物理化学特性
• 2.3 IHHNV病理学特征
• 2.4 IHHNV基因组结构
• 2.5 IHHNV的毒力变化、传播途径及诊断方法
• 2.6 IHHNV的分子流行病学研究进展
• 第三节 桃拉综合症病毒（TSV）研究综述
• 3.1 TSV分类地位、地理分布及宿主范围
• 3.2 TSV的物理化学特性
• 3.3 TSV病理学特征
• 3.4 TSV基因组结构
• 3.5 TSV的传播途径及诊断方法
• 3.6 TSV的分子流行病学研究进展
• 第四节 TSV BIR同源蛋白研究综述
• 第五节 本论文的研究内容和意义
• 第二章 传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）的分子流行病学研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试剂及材料
• 1.2 南美白对虾组织总核酸的提取
• 1.3 IHHNV的检测
• 1.4 序列分析
• 1.5 IHHNV的进化分析
• 2 结果
• 2.1 样品检测
• 2.2 序列分析
• 2.3 进化分析
• 3 讨论
• 第三章 桃拉综合症病毒（TSV）的分子流行病学研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试剂及材料
• 1.2 南美白对虾组织总RNA的提取和cDNA的合成
• 1.3 TSV的检测
• 1.4 TSV的序列分析
• 1.5 TSV的进化分析
• 2 结果
• 2.1 样品检测
• 2.2 序列分析
• 2.3 进化分析
• 3 讨论
• 第四章 TSV BIR同源蛋白功能的初步研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试剂及材料
• 1.2 细胞系
• 1.3 引物设计及PCR扩增
• 1.4 BIR基因片段的克隆
• 1.5 BIR蛋白的原核表达
• 1.6 BIR蛋白的纯化及抗血清的制备
• 1.7 重组BIR质粒的转染
• 2 结果
• 2.1 BIR基因的扩增
• 2.2 BIR基因片段的克隆
• 2.3 BIR蛋白的原核表达和抗体制备及效价测定
• 3 讨论
• 第五章 结论与展望
• 参考文献
• 发表文章目录
• 致谢