论文摘要
目的通过建立大鼠酒精性肝病模型，观察酒精性肝病发病过程中病理及超微结构变化，分析酒精性肝病羰基应激状态下蛋白酶体活性亚基LMP7亚基及蛋白酶体成熟蛋白POMP的表达量，研究酒精对其影响，并分析二者在酒精性肝病发病机制中的作用。方法健康雄性成年Wistar大鼠40只，体重180～200g，正常喂养1周后随机分为5组：正常对照组、模型1组、2组、3组、4组（各8只）。模型组给予酒精灌胃：1～4周给予40％酒精5g／kg·d，5～8周给予50％酒精7g／kg·d，9～12周给予60％酒精10g／kg·d，每日分2次给予；其食物构成为：酒精占总热卡的46％，蛋白质占18％，脂肪占14％（其中9％是不饱和脂肪酸），碳水化合物占12％，同时给予维生素复合物和必需矿物质。正常对照组予等量生理盐水，饮食中碳水化合物所占比例升至58％以代替酒精。大鼠分别于造模6周（模型1组）、8周（模型2组）、10周（模型3组）、12周（正常对照组、模型4组）处死。HE及电镜观察肝组织病理学改变，Bradford法测定蛋白含量，2，4-二硝基苯肼比色法测定大鼠肝组织蛋白质羰基含量，荧光定量PCR及Western印迹法检测蛋白酶体糜蛋白酶样活性亚基LMP7及蛋白酶体成熟蛋白POMP表达量。结果病理切片结果显示模型组大鼠6周时开始出现轻微脂肪变，随摄酒时间延长，病变逐渐加重，至12周时脂肪变明显，可见不同程度的肝细胞水肿、炎细胞浸润及Mallory小体；超微结构可见巨大及U型线粒体，线粒体膜断裂，嵴消失或断裂，糖原代谢异常，可见较多代谢产物髓样小体，染色质分布异常。模型组大鼠血清生化指标ALT、AST、ALP等与正常对照组相比均明显升高（P＜0.05）。随摄酒时间延长，各模型组羰基含量与对照组相比均明显增高（P＜0.05），并呈逐渐升高趋势。RT-PCR及Western-blotting印迹法显示LMP7亚基基因及蛋白表达量随摄入酒精时间延长表达量逐渐减少（P＜0.05），并与羰基含量呈负相关。蛋白酶体成熟蛋白POMP基因及蛋白水平随摄酒增多呈逐渐升高趋势（P＜0.05）。结论1本实验成功建立了大鼠酒精性肝病模型；2酒精性肝病时肝组织处于羰基应激状态，蛋白酶体活性亚基LMP7表达下降，可能在酒精性肝病发病机制中发挥重要作用；3慢性酒精摄入可抑制蛋白酶体功能，减少羰基化蛋白降解，引起细胞形态和功能改变；4酒精导致的蛋白酶体成熟机制异常可能在蛋白酶体功能下降机制中起重要作用。
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标签：酒精性肝病论文; 羰基论文; 蛋白酶体论文; 蛋白酶体成熟蛋白论文;