体外诱导兔骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的研究

论文摘要

目的探讨在体外诱导兔骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的的有效方法,以便为后续实验工作提供稳定的种子细胞来源。方法以密度梯度离心法自兔骨髓液获取骨髓间充质干细胞进行原代及传代培养,观察其形态学变化并鉴定。以5-氮杂胞苷、平滑肌细胞培养上清液诱导及与平滑肌细胞共培养诱导等方法诱导其向平滑肌细胞分化,通过形态学观察及免疫组化方法比较各种诱导方法的诱导效率。结果原代培养的兔骨髓间充质干细胞形态较为均一,呈成纤维细胞样,生长增殖迅速,传代培养生长良好。培养的细胞经流式细胞仪鉴定,CD34及CD45表达很弱、而CD90强表达,证明所培养的细胞为较纯的骨髓间充质干细胞。在各组诱导实验中,以5-氮杂胞苷诱导及共培养诱导联合处理组诱导组效率最高,单纯共培养诱导组与5-氮杂胞苷诱导及上清液诱导联合处理组次之,二组诱导率无显著差异,单纯以上清液诱导组效率最低。结论密度梯度离心结合贴壁筛选能获得较纯的骨髓间充质干细胞。5-氮杂胞苷及共培养诱导联合处理能有效地诱导其向平滑肌细胞分化。

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摘要

ABSTRACT

第一章引言

第二章材料与方法

2.1 实验试剂

2.2 主要液体的配制方法

2.3 仪器设备及耗材

2.4 实验动物

2.5 实验方法

2.5.1 兔BMMSCs 培养与鉴定

2.5.2 兔阴道SMCs 培养与鉴定

2.5.3 兔BMMSCs 的体外诱导分化

第三章结果

3.1 兔BMMSCs 生长曲线

3.2 兔BMMSCs 鉴定

3.2.1 形态结果

3.2.2 流式细胞仪结果

3.3 兔SMCs 鉴定

3.3.1 培养中SMCs 的形态

3.3.2 SMCs 的免疫组化检测

3.4 兔BMMSCs 诱导后的检测

3.4.1 诱导后的形态变化

3.4.2 免疫组化鉴定

3.5 附图

第四章讨论

4.1 BMMSCs 在阴道组织工程中的应用前景

4.2 BMMSCs 的分离、培养与鉴定方法

4.3 体外诱导 BMMSCs 向 SMCs 分化

4.4 展望

第五章结论

5.1 结论

5.2 进一步工作的方向

致谢

参考文献

综述:骨髓间充质干细胞:阴道组织工程的理想种子细胞?

攻读学位期间的研究成果

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