荧光嗜铁素的发酵条件及其应用初探

论文摘要

本试验对采集自上海青浦、松江、奉贤、南汇、浦东、嘉定等地区的104株荧光假单胞菌进行了CAS固体平板检测和CAS检测液检测，比较了不同菌株产生PVD荧光嗜铁素的产量，从中筛选出高产菌株SE-6，其PVD相对含量达到0.654。研究了荧光假单胞菌株SE-6在摇瓶培养下的培养基和发酵条件。通过单因素实验和正交优化实验，确定了最佳发酵培养基（1L）组成为甘油1.5g，水解酪蛋白1.0g，硫酸镁2.5g，磷酸氢二钾2.5g，发酵条件为温度28℃，起始pH6.5，接种量2％，装瓶量200mL／500mL，发酵时间46h左右，Fe3+浓度0.8mg／L时，SE-6菌株分泌的PVD量达到最大。 对SE-6菌株的发酵液进行了分离纯化。发酵液先经过离心后，除去菌体，再经过有机溶剂抽提，然后用SephadexG-25柱层析分离，得到了PVD提取液。用傅立叶变换红外光谱研究了PVD的主要功能集团，用Arnow分析法和Atkin分析法研究了嗜铁素的类型。前者用于儿茶酚型嗜铁素的检验，后者用于氧肟酸型嗜铁素的检验。结果显示Arnow分析和Atkin分析均成阳性，说明PVD既含有儿茶酚基团又含有氧肟酸基团，是一类混合型嗜铁素。 本试验还利用PVD在螯合铁离子前后其在特定波长的吸光值会发生改变这一特性，设计了一种用PVD来检测水环境中铁离子的方法。首先建立了PVD吸光值变化和铁离子浓度之间的标准曲线，Fe3+在0-2.25×10-6mol.L-1范围内遵守比尔定律。回归方程是：y=-0.00014+0.111238x。然后利用标准曲线来测定未知样品中的铁离子浓度，并对这种方法的准确度和精确度作出了评估。使这种方法可以应用于水环境的铁离子测定中，有助于了解和控制海洋中赤潮的形成。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 嗜铁素研究综述
• 1.1 嗜铁素的定义
• 1.2 嗜铁素的分类
• 1.3 嗜铁素的功能
• 2 荧光嗜铁素的综述
• 2.1 荧光嗜铁素的结构
• 2.2 荧光嗜铁素的功能与应用
• 3 铁离子的检测方法
• 4 选题的目的和意义
• 第二章 高产荧光嗜铁素的荧光假单胞菌株筛选
• 1 实验材料
• 1.1 菌种
• 1.2 培养基
• 1.3 试剂
• 1.4 仪器设备
• 2 实验方法
• 2.1 荧光假单胞菌发酵培养方法
• 2.2 荧光嗜铁素的 CAS固体平板检测
• 3 结果与分析
• 3.1 荧光假单胞菌发酵培养的结果
• 3.2 荧光假单胞菌株的CAS检测结果
• 第三章 荧光假单胞菌株高产 PVD的发酵条件研究
• 1 实验材料与方法
• 1.1 菌种
• 1.2 培养基
• 1.3 试剂
• 2 实验方法
• 2.1 培养基组成试验
• 2.1.1 碳源培养基对 PVD产生量的影响
• 2.1.2 氮源培养基对 PVD产生量的影响
• 2.1.3 培养基的优化试验
• 2.2 发酵条件试验
• 2.2.1 温度对 PVD产生量的影响
• 2.2.2 起始pH对 PVD产生量的影响
• 2.2.3 接种量对 PVD产生量的影响
• 2.2.4 装瓶量对 PVD产生量的影响
• 2.2.5 发酵时间对 PVD产生量的影响
• 2.2.6 铁离子对 PVD产生量的影响
• 3 结果与分析
• 3.1 培养基组成
• 3.2 发酵条件的选择
• 第四章 PVD的分离纯化及其理化性质
• 1 实验材料
• 1.1 试剂
• 1.2 仪器与设备
• 2 实验方法
• 2.1 发酵液的处理
• 2.2 凝胶的处理及装柱
• 2.3 PVD提取液的红外光谱分析
• 2.4 嗜铁素类型的检验
• 2.4.1 Arnow's assay
• 2.4.2 Atkin's assay
• 3 实验结果与分析
• 3.1 红外光谱分析
• 3.2 嗜铁素类型的检验
• 3+检测中的应用'>第五章 PVD在水环境 Fe³⁺检测中的应用
• 1 实验材料
• 1.1 实验仪器及试剂
• 1.2 样品
• 2 实验方法
• 2.1 吸光度的测定方法
• 2.2 pH 值对吸光值的的影响
• 2.3 缓冲溶液用量对吸光值的的影响
• 2.4 PVD用量对吸光值的的影响
• 2.5 溶液放置时间对吸光值的的影响
• 2.6 工作曲线的制作
• 2.7 样品中铁离子的测定
• 3 结果与分析
• 3.1 pH值对吸光值的的影响
• 3.2 缓冲溶液用量对吸光值的的影响
• 3.3 PVD用量对吸光值的的影响
• 3.4 溶液放置时间对吸光值的的影响
• 3.5 工作曲线
• 3.6 样品检验结果
• 小结
• 参考文献
• 致谢
• 论文独创性声明
• 论文使用授权声明