夏枯草预防和治疗肺癌的物质基础研究

论文摘要

肺癌系世界上发病率及死亡率较高的恶性肿瘤之一,目前国际上对肺癌的治疗以手术和放疗、化疗为主,但大多数肺癌确诊时已是晚期,不能手术。临床上使用的化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时,对机体正常的细胞也发生损害,从而使治疗不能顺利进行。中医药在预防和治疗肿瘤方面有着悠久的历史,从中药中寻找预防和治疗肿瘤效果好、毒副作用低的成分是开发新的防治肿瘤药物的重要途径。本课题选择具有清火、明目、散结、消肿之功效的传统中药夏枯草为模型药物,首次以全新的“物质基础组分结构理论”为指导,从体内体外角度,结合体外抗氧化作用,整体性地筛选夏枯草预防和治疗肺癌的物质基础的结构单元,初步研究夏枯草预防和治疗肺癌的物质基础。本论文首先对国内外预防和治疗肿瘤的药物筛选进展和夏枯草化学成分及药理作用进行文献研究,其后再进行如下的实验研究:(1)对夏枯草物质基础结构单元进行分级提取,并运用紫外法和高效液相色谱法对各物质基础结构单元进行成分表征。采用95%、60%、30%乙醇和水梯度提取夏枯草物质基础结构单元;对各结构单元化学成分组成进行分析;运用紫外法建立四个物质基础结构单元中总三萜、总黄酮、总酚的含量测定方法;运用高效液相色谱法对各结构单元进行成分表征,并测定了95%乙醇部位中熊果酸和齐墩果酸的含量。(2)对夏枯草预防和治疗肺癌的物质基础结构单元进行体外筛选及其配伍研究采用MTT法体外筛选夏枯草预防和治疗肺癌的物质基础结构单元。夏枯草四个部位单独作用于2种人肺癌细胞时,均是60%乙醇部位的增殖抑制作用最强,其次是95%乙醇部位。60%乙醇部位与其它部位配伍给药后,对2种人肺癌细胞株的抑制作用显著强于各部位单独给药。配伍后,四个结构单元配伍给药的效果最佳:三个结构单元配伍使用的抑制作用并不比60%和95%乙醇部位两个结构单元配伍的抑制作用好。从筛选的角度看,60%与95%乙醇部位是夏枯草直接抑制肺癌细胞的有效的结构单元。(3)对夏枯草预防和治疗肺癌的物质基础结构单元进行体内筛选采用右腋皮下接种法接种小鼠Lewis肺癌,建立小鼠皮下移植性肿瘤模型,通过灌胃法给予夏枯草各结构单元药物,观察夏枯草各物质基础结构单元对荷瘤小鼠的抑瘤作用,结果表明60%和95%乙醇部位有较好的抑瘤作用,与体外筛选结果一致。体内外筛选实验结果表明这两个结构单元已基本涵括夏枯草预防和治疗肺癌的物质基础。(4)对夏枯草预防和治疗肺癌的物质基础结构单元进行初步的抗氧化作用研究采用清除自由基能力的方法(ABTS法和DPPH法)和基于抗氧化剂的还原能力法(FRAP法)对夏枯草进行体外抗氧化作用研究,结果表明60%乙醇部位的抗氧化活性最强,与体内外筛选出的最有效的预防和治疗肺癌的物质基础结构单元结果相一致。通过体内外筛选实验,结合体外抗氧化作用,筛选出60%和95%乙醇部位是夏枯草预防和治疗肺癌的有效的物质基础结构单元,整体角度表明夏枯草预防和治疗肺癌的物质基础主要为三萜及其皂苷类、黄酮类、酚类等组分。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 预防和治疗肿瘤药物研究进展
• 1.1 前言
• 1.2 中医药治疗肺癌研究进展
• 1.3 中医药预防和治疗肿瘤作用机理研究进展
• 1.4 目前国际上肿瘤化学预防药物的筛选研究进展
• 1.5 目前国内中医药预防和治疗肿瘤的活性组分筛选研究进展
• 1.6 夏枯草主要化学成分及药理作用研究进展
• 参考文献
• 第二章 夏枯草物质基础结构单元的分级分离及各结构单元成分表征
• 2.1 夏枯草物质基础结构单元的分级分离
• 2.1.1 仪器与试药
• 2.1.2 结构单元的分级提取与分离
• 2.1.3 结构单元得率的计算
• 2.2 夏枯草各结构单元成分表征
• 2.2.1 化学成分预试验
• 2.2.2 紫外法表征各结构单元主要成分
• 2.2.3 高效液相色谱法初步表征各结构单元成分
• 2.3 本章小结
• 参考文献
• 第三章 夏枯草预防和治疗肺癌的物质基础结构单元体外筛选及其配伍研究
• 3.1 仪器、材料与试药
• 3.1.1 仪器
• 3.1.2 细胞株
• 3.1.3 试剂
• 3.1.4 药物
• 3.2 方法与结果
• 3.2.1 体外肺癌细胞模型的建立
• 3.2.2 抗肺癌有效结构单元的筛选
• 3.3 本章讨论
• 3.4 本章小结
• 参考文献
• 第四章 夏枯草预防和治疗肺癌的物质基础结构单元体内筛选
• 4.1 实验仪器及试药
• 4.1.1 仪器
• 4.1.2 动物及瘤株
• 4.1.3 试剂
• 4.1.4 药物
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 小鼠Lewis肺癌模型的制备
• 4.2.2 分组与给药
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 Lewis肺癌小鼠的一般状态
• 4.3.2 夏枯草各结构单元对Lewis肺癌小鼠肿瘤的抑制作用
• 4.3.3 夏枯草各结构单元对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫器官的影响
• 4.3.4 小鼠肿瘤病理学观察
• 4.4 本章讨论
• 4.4.1 筛选方法的选择
• 4.4.2 对肿瘤的生长影响
• 4.4.3 对免疫器官的初步影响
• 4.5 本章小结
• 参考文献
• 第五章 夏枯草预防和治疗肺癌的物质基础结构单元抗氧化作用初步研究
• 5.1 实验仪器与试药
• 5.2 方法与结果
• 5.2.1 清除自由基能力的方法
• 5.2.2 基于抗氧化剂的还原能力法
• 5.3 本章讨论
• 5.4 本章小结
• 参考文献
• 第六章 结语
• 6.1 主要结论
• 6.2 创新点
• 6.3 工作展望
• 6.3.1 夏枯草预防和治疗肺癌物质基础的深层次研究
• 6.3.2 夏枯草体内抗氧化作用研究
• 6.3.3 夏枯草预防和治疗肺癌的作用机制研究
• 致谢
• 硕士期间发表文章与学术交流一览