β2-微球蛋白抗体激活非霍奇金淋巴瘤患者树突状细胞的免疫应答

论文摘要

目的:树突状细胞（DC）是目前已知功能最强的抗原递呈细胞,负载肿瘤抗原的DC能够有效激活细胞毒性T细胞（CTL）并产生抗肿瘤免疫的能力,对清除肿瘤微小病灶和解决肿瘤复发具有重要的意义。但由于肿瘤抗原性弱,往往制约着DC的应用。而特异性抗体可以直接诱导恶性淋巴瘤等多种肿瘤凋亡,具有针对性强等优点,并且有研究证实,部分抗体可以诱导DC激活CTL,增强抗肿瘤效应,为治愈肿瘤带来了希望。β2-微球蛋白（β2-microglobulin,β2-MG）是一种小分子蛋白类物质,以构成MHC-Ⅰ类分子表达于所有有核细胞表面。在恶性淋巴瘤中,β2-MG水平与疾病的发生、进展及疗效相关,已成为恶性淋巴瘤预后判断的重要因素之一。研究证明,β2-MG不能诱导DC成熟和T细胞活化,而β2-MG抗体是β2-MG特异性单克隆抗体,可以诱导包括NHL在内的多种血液系统恶性肿瘤细胞凋亡,并且DC上表达有β2-MG的组成成分,如MHC-Ⅰ类、CD1及FcγR分子。本实验用β2-MG抗体与NHL患者骨髓源性DC共培养,探讨β2-MG抗体能否与DC上相应分子结合以激活DC,诱导CD4+Th1细胞活化和CTL抗NHL瘤细胞效应,为增强DC疫苗在淋巴瘤治疗中的应用提供可行性依据。方法:采集初诊NHL患者正常骨髓单个核细胞,常规经GM-CSF、IL-4及TNF-a联合诱导DC生成,分别以25ug/mlβ2-MG、25ug/mlβ2-MG抗体及25ug/mlβ2-MG加等量β2-MG抗体与DC共培养作为实验组A、B及C,以等量IgG与DC培养作为对照组A,以DC单独培养作为空白对照组。光镜下观察DC形态;流式细胞术分析DC免疫表型;ELISA法检测IFN-γ分泌情况;MTT法检测CTL杀伤效应。结果:NHL骨髓源性DC在加入β2-MG（实验组B）3小时后及继续培养至第8天,DC表型CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR较空白对照组未见明显升高（P＞0.05）,随后与患者自身T细胞培养,亦未见IFN-γ分泌明显增多（296.37±40.04vs384.42±23.86pg/ml,P＞0.05）;加入β2-MG抗体（实验组A）培养3小时后和第8天,除CD1a外其余4种表型均较实验组B、对照组A和空白对照组表达升高,与自身T细胞共培养后,上清液中IFN-γ水平（628.99±30.59 pg/ml）显著高于对照组A（137.58±32.53pg/ml）和空白对照组（384.42±23.86pg/ml,P＜0.05）,活化T细胞和NHL瘤细胞（Raji细胞）共孵育,杀伤率显著高于空白对照组（P＜0.05）;进一步实验显示,等量25ug/mlβ2-MG和β2-MG抗体共孵育30min后冲击DC（实验组C）,亦具有激活CTL的能力,与实验组A相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:β2-MG作为一种肿瘤相关性抗原,因抗原性弱,与DC亲和力低,不能明显诱导NHL患者骨髓源性DC成熟和CD4+Th1细胞活化;而β2-MG抗体是β2-MG特异性单克隆抗体,能够与DC结合并诱导DC成熟,同时负载β2-MG抗体的DC能够显著激活NHL患者自身CD4+Th1细胞和CTL细胞,进一步诱导对NHL瘤细胞的杀伤效应;β2-MG联合β2-MG抗体与DC共培养,亦具有激活CTL抗NHL的能力,说明NHL患者体内游离β2-MG并不能抑制β2-MG抗体对DC的激活作用。本实验为NHL的免疫治疗提供了一条新的治疗策略,为增强DC瘤苗在淋巴瘤的应用提供了新的研究模式。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 硕士期间研究成果
• 致谢
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• 综述