BTBD-10基因在人脑胶质瘤细胞中功能的初步研究

论文摘要

目的：初步了解人胶质瘤相关基因BTBD10在胶质瘤细胞周期与细胞凋亡过程中的作用。方法：1、构建pcDNA4c-BTBD10基因表达载体。2、pcDNA4c-BTBD10载体转染U-251胶质瘤细胞株，MTT法绘制生长曲线，流式细胞仪检测转染后细胞增殖及分化情况。3、构建pEGFP N1-BTBD10绿荧光载体，转染U251、AD293细胞株，了解BTBD10基因的亚细胞定位。DAPI染色了解细胞核形态。4、免疫组化方法检测转染后细胞BAX／BCL-2、Ki67蛋白表达情况。结果：1、成功构建pcDNA4c-BTBD10基因表达载体。2、pcDNA4c-BTBD10载体成功转染U-251胶质瘤细胞株，MTT法绘制生长曲线，流式细胞仪检测转染后细胞发现细胞出现凋亡，被转染细胞阻滞在S期。3、成功构建pEGFP N1-BTBD10绿荧光载体，发现BTBD10基因定位于细胞核，转染后U251细胞株出现凋亡。4、免疫组化方法检测转染后细胞发现：Bax抗原表达上升，Bcl2抗原表达下降，Ki67抗原表达下降。结论：人胶质瘤相关基因BTBD10具有阻止胶质瘤细胞增殖和诱导胶质瘤细胞株凋亡的功能。

论文目录

• 中英文对照表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 pcDNMC-BTBD10载体构建
• 一、材料和方法
• （一） 材料
• （二） 方法
• 二、结果
• （一） 引物
• （二） 质粒双酶切
• （三） 测序
• 三、讨论
• （一） 方法
• （二） 有关BTBD10基因
• 四、结论
• 第二部分 BTBD10-pCDNA4C质粒转染胶质瘤U-251细胞株,检测其对增殖、分化的影响。
• 一、材料和方法
• （一） 材料
• （二） 方法
• 二、结果
• （一） 细胞凋亡
• （二） 细胞周期
• （三） MTT法
• （四） 生长曲线
• 三、讨论
• （一） 方法
• （二） 结果讨论
• 四、结论
• 第三部分 pEGFPN1-BTBD10表达载体的构建和转染,BTBD10基因亚细胞定位和转染后细胞Bax／Bcl2、Ki67等抗原的检测。
• 一、材料和方法
• （一） 材料
• （二） 方法
• 二、结果
• （一） 引物
• （二） 质粒双酶切
• （三） 质粒测序
• （四） 绿荧光发光,DAPI染色
• （五） 免疫组化结果
• 三、讨论
• （一） 绿荧光载体与亚细胞定位
• （二） DAPI染色与细胞凋亡
• （三） His-Tag
• （四） Bax／Bcl2
• （五） Ki67
• 四、结论
• 总结及展望
• 综述
• 致谢