草鱼FAS、LEPR、JAK2、STAT3基因的克隆和组织表达分析及饲料脂肪水平对FAS基因表达的影响

论文摘要

试验一草鱼脂肪酸合成酶（Fatty Acid Synthetase,FAS）、瘦素受体（Leptin Receptor, LEPR）、JAK2（ Janus kinase 2）和STAT3 （Signal Transducer and Activator of Transcription 3）基因片段序列的克隆和组织表达分析通过设计简并引物,进行RT-PCR克隆草鱼FAS、LEPR、JAK2、STAT3基因片段序列,运用SMS在线工具包和BioEdit软件及BLASTP程序进行片段序列的氨基酸推导和氨基酸同源性分析,并采用实时荧光定量PCR分析FAS、瘦素（Leptin）、LEPR、JAK2、STAT3基因在草鱼不同组织中的表达情况,结果表明:（1）克隆获得草鱼FAS基因片段序列长683bp,编码226个氨基酸,氨基酸序列分析表明草鱼FAS基因与其他物种的相似性在95%-66%之间;克隆获得草鱼LEPR基因片段序列长713bp,编码237个氨基酸,氨基酸序列分析表明草鱼LEPR基因与其他物种的相似性在86%-35%之间;克隆获得草鱼JAK2基因片段序列长671bp,编码223个氨基酸,氨基酸序列分析表明草鱼JAK2基因与其他物种的相似性在91%-70%之间;克隆获得草鱼STAT3基因片段序列长770bp,编码256个氨基酸,氨基酸序列分析表明草鱼STAT3基因与其他物种的相似性在100%-96%之间;（2）采用实时荧光相对定量PCR分析表明草鱼FAS、Leptin、LEPR、JAK2、STAT3基因在肝胰脏、肌肉、脑、心脏、脾脏和肠系膜脂肪组织中均有表达:FAS基因在草鱼肝胰脏组织中表达量最多,其次是心脏、脑和肠系膜脂肪组织,在脾脏组织中表达量最低;Leptin基因在草鱼肠系膜脂肪组织中表达量最多,其次是肝胰脏、脑和心脏组织,在肌肉和脾脏组织中表达量最低;LEPR基因在草鱼脾脏组织中表达量最多,其次是心脏、脑、肠系膜脂肪和肌肉组织,在肝胰脏组织中表达量最低;JAK2基因在草鱼肝胰脏组织中表达量最多,其次是肌肉、脑、脾脏和肠系膜脂肪组织,在心脏组织中表达量最低;STAT3基因也是在草鱼肝胰脏组织中表达量最多,其次是脾脏、肠系膜脂肪、脑和肌肉组织,而在心脏组织中只有微量表达。试验二饲料脂肪水平对草鱼FAS基因表达的影响在饲料中添加不同水平的脂肪（0%、2%、4%）,饲养平均体重为（134.3±12.1）g的草鱼8周,饥饿24h后,测定草鱼肝胰脏中FAS活性,并运用实时荧光定量PCR测定不同脂肪水平饲喂下草鱼肝胰脏中FAS基因的mRNA表达丰度。结果显示,与对照组（0%）相比,添加2%、4%脂肪组的肝胰脏FAS活性下降了33%、64% （P<0.05）;FAS基因mRNA表达丰度下降了18%、74%。综上所述,饲料中脂肪水平能够抑制FAS的活性和mRNA表达,脂肪水平越高抑制作用越明显。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 1 鱼类脂肪代谢
• 2 脂肪酸合成酶（FAS）与脂肪代谢
• 2.1 FAS 的结构与研究进展
• 2.2 FAS 与脂肪代谢
• 3 瘦素（Leptin）与脂肪代谢
• 3.1 Leptin 的结构及其研究进展
• 3.2 瘦素受体（Leptin Receptor, LEPR or Obese Receptor , OB-R）的结构及其研究进展
• 3.3 Leptin 的信号转导通路—JAK2/STAT3
• 3.4 Leptin 与脂肪代谢
• 4 本次研究目的、内容、意义
• 第二章 草鱼FAS、LEPR、JAK2、STAT3 基因的克隆及其组织表达分析
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 草鱼肝胰脏、肌肉、脑、心脏、脾、肠系膜脂肪组织提取
• 2.2 草鱼FAS 基因的克隆及其序列分析
• 2.3 草鱼LEPR 基因的克隆及其序列分析
• 2.4 草鱼JAK2 基因的克隆及其序列分析
• 2.5 草鱼STAT3 基因的克隆及其序列分析
• 2.6 草鱼FAS、Leptin、LEPR、JAK2 和STAT3 基因的组织表达差异
• 3 讨论
• 3.1 FAS 基因
• 3.2 Leptin 基因
• 3.3 LEPR 基因
• 3.4 JAK2 基因
• 3.5 STAT3 基因
• 4 小结
• 第三章 饲料中不同脂肪水平对草鱼FAS 基因表达的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 饲料脂肪水平对草鱼肝胰脏中FAS 活性的影响
• 2.2 实时荧光定量PCR 的标准曲线和融解曲线分析
• 2.3 饲料中脂肪水平对草鱼FAS 基因mRNA 表达丰度的影响
• 3 讨论
• 3.1 饲料中脂肪水平对肝胰脏组织FAS 活性及mRNA 表达的影响
• 3.2 饲料中脂肪种类对肝胰脏组织FAS 活性及mRNA 表达的影响
• 4 小结
• 参考文献
• 致谢