苯妥英钠对C57BL/6胚鼠颅面组织中Satb2和Hoxa2基因表达的影响

苯妥英钠对C57BL/6胚鼠颅面组织中Satb2和Hoxa2基因表达的影响

论文摘要

背景与目的面部的发生是由一系列复杂的过程所组成,包括神经嵴细胞的增殖、迁移、分化、细胞外基质的产生和细胞凋亡等。到目前为止,已知越来越多的基因在此过程中起重要作用,常见的有TGFα、TGFβ3、Msx1、IRF6等。在这个过程中任何外界致畸因子的作用或某些自身基因表达异常都有可能引起颅面畸形的发生,最常见的是先天性唇腭裂畸形。苯妥英钠是研究较多的一个致畸因子,但关于苯妥英钠引起唇腭裂机制的研究存在很多的不同点。现阶段主要有两种说法,一种是由于活化前列腺素H合成酶(prostaglandin H synthase,PHS),引起胚胎蛋白质和DNA的氧化损伤;另一种是苯妥英钠引起Hoxa2 mRNA低表达导致腭突融合障碍。SATB2基因是最近发现的与人面部发生密切相关的一个基因,小鼠Satb2基因特异性表达于上颌突、额鼻突和逐渐形成的腭骨架的内侧,Satb2基因可以抑制Hox家族基因包括Hoxa2基因的表达。这就说明苯妥英钠与Satb2基因在唇腭裂发生过程中可能存在相互作用。本实验运用TaqMan探针技术行实时定量PCR,研究苯妥英钠对C57BL/6系胚鼠颅面组织中Satb2和Hoxa2基因mRNA表达的影响,探讨苯妥英钠在唇腭裂发生过程中可能作用机制,为寻找苯妥英钠引起唇腭裂的预防措施提供参考依据。方法1.孕C57BL/6小鼠30只,随机分为苯妥英钠组(PHT)、生理盐水对照组(NS),再按受孕时间的不同分为GD11.5(Gestation Day,GD)、GD12.5和GD13.5组,每组各5只。2.PHT组小鼠在孕第10天腹腔注射苯妥英钠(溶解于生理盐水中,65 mg/kg),对照组腹腔注射生理盐水(10 ml/kg)。分别在GD11.5、GD12.5和GD13.5断颈处死孕鼠,解剖显微镜下分离胚鼠颅面组织。3.异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取组织总RNA,琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法鉴定RNA的完整性及纯度。4.DNase处理RNA样本,然后行逆转录法合成第一链cDNA。5.运用TaqMan探针技术行实时荧光定量PCR,检测Satb2和Hoxa2基因表达量的变化。结果1.Satb2和Hoxa2基因在正常胚鼠发育第11.5天到13.5天的颅面组织中均有表达。Satb2基因相对表达量分别为14.022、40.33、66.412;Hoxa2基因相对表达量分别为1.682、5.87、1.337。不同时点的表达量有显著性差异。2.与对照组相比,PHT组相应时点Satb2基因表达量明显低于NS组(P<0.01);Hoxa2基因的表达量则高于对照组(P<0.01)。结论Satb2和Hoxa2基因在胚鼠唇腭发生的关键时期有表达,进一步证实Satb2和Hoxa2基因是小鼠唇腭发生中的重要基因。Satb2和Hoxa2基因在不同时点的表达量有显著性差异。从胚鼠发育第11.5天到13.5天,Satb2基因在颅面组织的表达量中逐渐升高;Hoxa2基因表达量先升高后降低。苯妥英钠作用的C57BL/6孕鼠其胚鼠颅面组织中Satb2基因表达量明显下降,Hoxa2基因表达量相对升高;苯妥英钠可能通过调节Satb2和Hoxa2基因的表达引起唇腭裂。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 缩略语
  • 目录
  • 第1章 前言
  • 第2章 材料与方法
  • 2.1 材料来源
  • 2.1.1 动物来源
  • 2.1.2 主要试剂
  • 2.1.3 仪器与设备
  • 2.1.4 引物与荧光探针合成
  • 2.1.5 试剂配制方法
  • 2.2 实验步骤
  • 2.2.1 一般情况
  • 2.2.2 实验分组
  • 2.2.3 标本采集
  • 2.2.4 总RNA提取
  • 2.2.5 DNase处理总RNA
  • 2.2.6 逆转录合成cDNA第一链
  • 2.2.7 PCR检测cDNA样本
  • 2.2.8 实时荧光定量PCR
  • 2.3 统计学处理
  • 第3章 结果
  • 3.1 RNA纯度及完整性分析
  • 3.2 RT-PCR
  • 3.3 实时荧光定量PCR对样品的测定
  • 第4章 讨论
  • 4.1 面部的发生与先天性唇腭裂畸形
  • 4.2 苯妥英钠与先天性唇腭裂畸形
  • 4.3 Satb2和Hoxa2基因与先天性唇腭裂畸形
  • 第5章 结论
  • 第6章 展望
  • 参考文献
  • 综述
  • 致谢
  • 发表论文
  • 个人简历
  • 相关论文文献

    • [1].电子烟烟雾气体染毒对C57BL/6小鼠肠道菌群的影响[J]. 医学信息 2020(06)
    • [2].低能量强脉冲光影响C57BL/6小鼠毛发生长的实验研究[J]. 中外医学研究 2020(18)
    • [3].纯化前后C57BL/6小鼠骨髓细胞诱导破骨细胞的方法研究[J]. 实用骨科杂志 2020(09)
    • [4].脱氧胆酸对C57BL/6小鼠回肠类器官生长的影响[J]. 南方医科大学学报 2017(01)
    • [5].雷公藤内酯醇对C57BL/6小鼠亚慢性毒性作用的研究[J]. 中成药 2014(05)
    • [6].C57BL/6小鼠胚胎成纤维细胞生物学特性及饲养层制备[J]. 中国组织工程研究 2014(11)
    • [7].养血生发胶囊对C57BL/6小鼠毛发生长的影响及机制[J]. 现代药物与临床 2010(02)
    • [8].C57BL/6小鼠原位膀胱肿瘤模型的建立[J]. 现代泌尿外科杂志 2009(04)
    • [9].生发酊对C57BL/6小鼠毛囊细胞凋亡的影响[J]. 中国当代医药 2016(12)
    • [10].米诺环素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶诱导C57BL/6小鼠行为学损伤的抑制作用研究[J]. 中国药学杂志 2016(16)
    • [11].C57BL/6小鼠放射性心脏损伤动物模型的建立及血清标志物的探讨[J]. 安徽医科大学学报 2015(07)
    • [12].氯氮平对雄性C57BL/6小鼠血糖和骨骼肌过氧化物酶体增殖物激活受体-γ mRNA表达的影响[J]. 中南药学 2009(09)
    • [13].一株O型口蹄疫病毒在C57BL/6小鼠和原代细胞的传代及其全序的测定和分析[J]. 微生物学报 2020(07)
    • [14].黑枸杞花青素对C57BL/6小鼠白色脂肪棕色化干预作用研究[J]. 现代农业科技 2020(18)
    • [15].维生素D受体在C57BL/6小鼠十二指肠中的定位表达分析[J]. 中国实验动物学报 2017(03)
    • [16].自身免疫性肝炎C57BL/6小鼠肝脏病理特点的实验研究[J]. 昆明医科大学学报 2016(10)
    • [17].奥斯曼生眉液对C57BL/6小鼠毛发生长影响的研究[J]. 中国美容医学 2014(06)
    • [18].生发酊对C57BL/6小鼠毛发生长作用的实验研究[J]. 江苏中医药 2012(01)
    • [19].高脂饮食诱导C57BL/6小鼠出现外周神经病变的研究[J]. 中国糖尿病杂志 2012(12)
    • [20].C57BL/6小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养与纯化鉴定[J]. 黑龙江畜牧兽医 2015(03)
    • [21].寒冷对雌性C57BL/6小鼠动情周期的影响[J]. 中国应用生理学杂志 2019(05)
    • [22].肉桂提取物对高脂喂养的C57BL/6小鼠肝脏脂肪变的改善作用及机制研究[J]. 辽宁中医杂志 2016(12)
    • [23].链脲佐菌素诱导C57BL/6小鼠发生糖尿病视网膜病变[J]. 中国老年学杂志 2013(01)
    • [24].复方蛹虫草制剂对C57BL/6荷瘤小鼠免疫功能的影响[J]. 中国实验方剂学杂志 2012(15)
    • [25].细胞粘附分子在C57BL/6小鼠垂体的表达与分布[J]. 汕头大学医学院学报 2010(02)
    • [26].年龄对C57BL/6小鼠脑突触结合蛋白量的影响[J]. 医学研究杂志 2009(06)
    • [27].冬凌草甲素和冬凌草多糖膀胱灌注治疗C57BL/6小鼠膀胱肿瘤的疗效及机制[J]. 中国病理生理杂志 2010(07)
    • [28].4NQO诱发C57BL/6小鼠舌癌及食管鳞状细胞癌模型的建立[J]. 苏州大学学报(医学版) 2010(05)
    • [29].水杨酸对C57BL/6小鼠耳蜗声损伤的作用[J]. 中国临床医学 2008(02)
    • [30].雷帕霉素对脂多糖诱导的C57BL/6小鼠急性肺损伤模型白介素-33表达及失控性炎症影响实验研究[J]. 重庆医科大学学报 2020(06)

    标签:;  ;  ;  ;  

    苯妥英钠对C57BL/6胚鼠颅面组织中Satb2和Hoxa2基因表达的影响
    下载Doc文档

    猜你喜欢