论文摘要
目的：miRNAs作为小分子非编码核糖核酸,已证实参与调节多种肿瘤细胞的化疗敏感性,但与宫颈鳞癌的相关机制研究很少。近年来化疗已成为晚期宫颈鳞癌的主要治疗手段之一,化疗耐药亦成为导致死亡的重要原因。基于前期研究发现,在宫颈鳞癌同期化放疗抵抗的宫颈组织中存在miR-181a的表达上调,但与宫颈鳞癌化疗抵抗之间的关系及机制尚不明确。本研究拟探讨宫颈鳞癌miR-181a的表达对化疗敏感性的影响及作用机制,为临床治疗提供依据。材料和方法：本研究采用两种宫颈鳞癌细胞株Me180和SiHa, RNA表达检测和细胞毒性实验分别检测两株细胞中miR-181a表达和化疗敏感性的差异。体外实验中利用转染pWPXL-miR-181a或miR-181a inhibitor上调或下调细胞中miR-181a的表达,检测细胞化疗敏感性的变化。体内试验中建立裸鼠皮下移植瘤模型,检测miR-181a对顺铂治疗后的移植瘤体积及重量的影响。采用细胞增殖、凋亡及细胞周期实验探索miR-181a影响化疗敏感性的机制。联合PicTar、Targetscan和mRNA芯片筛选出靶基因,并在RNA和蛋白水平验证miR-181a对于靶基因表达的影响。利用功能实验检测靶基因对化疗敏感性的调节作用,进而功能恢复实验确证miR-181a能否通过调节靶基因表达影响宫颈鳞癌细胞的化疗敏感性。结果：miR-181a在化疗抵抗的SiHa细胞中表达明显高于化疗敏感的Me180细胞的表达。上调Me180细胞中miR-181a的表达可增强细胞的化疗抵抗性,抑制SiHa细胞中miR-181a表达逆转细胞的化疗抵抗性。裸鼠皮下移植瘤模型得到相似结果,接种稳定转染pWPXL-miR-181a的Me180细胞的裸鼠经顺铂处理后成瘤的体积和重量均明显高于对照组。凋亡实验显示miR-181a可抑制顺铂诱导的细胞凋亡,而细胞增殖与细胞周期实验中niR-181a对于宫颈鳞癌细胞的增殖与细胞周期分布无调节作用。联合上述机制研究以及PicTar、Targetscan和mRNA芯片筛选出PRKCD作为可能的靶基因。基于前期研究证实miR-181a可与PRKCD的3’-UTR序列互补结合,本实验在mRNA和蛋白水平验证miR-181a抑制PRKCD表达。通过功能和功能恢复实验得出miR-181a至少可部分通过抑制PRKCD的表达以介导宫颈鳞癌细胞的化疗抵抗。结论：宫颈鳞癌细胞Me180与SiHa中miR-181a可能通过下调PRKCD表达介导宫颈鳞癌的化疗抵抗性,使得miR-181a有望成为宫颈鳞癌化疗敏感性的预测指标及治疗靶点,用于临床筛选化疗敏感患者及逆转化疗抵抗,指导个体化治疗。创新性1、首次在宫颈鳞癌中发现miR-181a的异常表达与顺铂化疗抵抗的关系,可成为宫颈癌化疗敏感性的预测指标；2、首次在宫颈鳞癌中发现miR-181a通过靶向PRKCD调节顺铂化疗敏感性的作用机制。潜在应用价值1、miR-181a可能成为宫颈鳞癌化疗敏感性的预测指标,用于临床筛选化疗敏感患者,指导个体化治疗。2、miR-181a可能成为临床潜在的治疗靶点,用于逆转宫颈鳞癌患者的化疗抵抗并实施真正意义上的个体化治疗。