首页> 正文

耐力训练影响ApoE-/-小鼠炎症因子表达与AS防治机制研究

2020-11-29阅读(556)

耐力训练影响ApoE-/-小鼠炎症因子表达与AS防治机制研究

论文摘要

动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是严重危害人类健康的疾病之一。当前,以AS为病理基础的心、脑血管疾病的发病率和死亡率均居各种疾病前列。研究AS的发病机理及其防治手段成为医学领域研究的热点和重要课题。一般认为,AS的发生发展是多种遗传因素和环境因素相互作用的结果。近年研究显示,AS是血管内皮损伤后的一种高度特异性的慢性炎症反应过程,炎症是AS中一个关键的致病机制。因此,抗炎治疗有望成为AS新的防治手段。运动锻炼作为AS综合防治中的重要干预手段之一是运动医学领域极为关注的课题。在运动医学领域虽早已开展相关研究工作,但多为整体、器官水平的研究。已有研究证实,有氧运动对AS形成具有明显的干预效果,但对其机制的研究尚显不足。目前尚未见到有关运动干预AS炎症反应机制方面的研究报道,并缺乏运动对已经形成的AS的治疗或改善作用的相关研究。运动锻炼抗阻AS病理进程的机制尚缺乏足够的实验与理论依据。目的:本研究以参与AS炎症反应调控的核转录因子-κB（NF-κB）及其诱导的炎症因子表达在AS中的作用为主线,深入探讨运动对AS的干预效果。在复制实验动物AS模型的基础上,采用病理学、生物化学及分子生物学等研究方法及相关技术,从运动影响AS炎症反应角度探讨运动对AS的干预作用,并从分子水平进一步阐明运动防治AS的可能机制。方法:选取8周龄ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠48只,饲以“西方类型”膳食,随机分为AS预防组（14周实验组）和AS治疗组（26周实验组）,即:14周AS模型组（H组）、14周跑台运动组（HE组）,26周AS模型组（HH组）、14周造模+12周跑台运动组（H+E组）;并选取8周龄同品系C57BL/6J小鼠24只作为对照组,随机分为14周对照组（N1组）和26周对照组（N2组）。每组12只,雄性。令HE组和H+E组小鼠在动物活动跑台上进行耐力性运动（13m/min,60min/次,每周5次）,分别用于观察耐力运动对AS形成的预防作用和运动对已经形成的AS的治疗或改善效果。在实验过程中每周测量小鼠体重的变化,并观察其生长状况、饮食量、精神状况及对运动负荷的适应能力等。实验周期结束后,采取眼球摘除法从小鼠眼眶静脉丛采集血液标本,用于测定血脂和氧化型低密度脂蛋白（OX-LDL）水平;并取心脏及主动脉近心端1-1.5cm组织制备主动脉根部冰冻切片,从主动脉瓣尖出现起作连续横切,切片厚度7μm。每间隔10张取1张,分别用于油红0染色、HE染色、原位杂交及免疫组化分析等。采用常规生化检测法测定血脂水平;采用双抗夹心酶联免疫ELISA法测定OX-LDL水平;主动脉根部冰冻切片行油红0染色,通过计算机图像分析系统评估AS斑块面积;主动脉切片行HE染色光镜下分析主动脉组织病理变化;主动脉切片行原位杂交法测定主动脉NF-κBmRNA表达;主动脉切片行免疫组化法测定主动脉NF-κBp65及相关炎症因子的表达等。通过对主动脉AS斑块面积进行定量评估和组织病理分析,并结合OX-LDL对NF-κB的激活及其诱导的炎症因子表达和相关分析,从分子水平上深入研究与阐明运动防治AS的可能机制。结果:1、ApoE-/-小鼠生长状况及体重的变化实验过程中各组小鼠体重均呈稳步增长,实验动物生长发育正常,运动组小鼠对运动负荷适应良好。2、耐力训练对ApoE-/-小鼠AS形成及主动脉组织病理形态学的影响①耐力训练对ApoE-/-小鼠主动脉AS形成的干预效果与正常对照组(C57BL/6J)小鼠比较,22周龄ApoE-/-小鼠（H组）主动脉根部血管内膜上可见到大量被染成鲜红色的AS斑块,斑块面积占血管腔总面积的41.79±6.93%;耐力运动组（HE组）主动脉根部亦可见AS斑块,但与H组比较,其斑块面积显著减小,斑块面积占血管腔面积比例为25.07±7.94%（P＜0.01）。主动脉切片经HE染色光学显微镜观察病理特征显示,H组小鼠主动脉可见许多脂纹-纤维斑块期病变和少量粥样斑块病变,结果提示本实验中ApoE-/-小鼠AS模型建立已经成功;与H组比较,HE组小鼠主动脉AS病变程度明显减轻,AS病变多限于脂纹期,仅局部形成少量纤维斑块。表明14周耐力运动具有预防或减少AS形成的作用。②耐力训练对ApoE-/-小鼠已形成的AS的干预效果与H组比较,HH组小鼠主动脉AS病变进一步加重,AS斑块面积与血管腔总面积比例达58.80±6.40%,且多为粥样斑块病变或出现易损斑块特征。对已形成AS的H+E组小鼠实施12周耐力运动干预后发现,其主动脉AS斑块面积占血管腔总面积比例为50.35±3.52%,与H组比较有显著性差异（P＜0.05）,但较HH组AS斑块面积显著减少（P＜0.05）,且病变程度相对减轻。表明12周耐力运动对ApoE-/-小鼠已经形成的AS具有减缓或控制其病变进程的作用。3、耐力训练对ApoE-/-小鼠血脂水平的影响与正常对照组比较,ApoE-/-小鼠血清TC、TG、LDL-C水平均显著升高,HDL-C显著降低,表明ApoE-/-小鼠出现典型的高胆固醇血症和血脂紊乱;而耐力性运动对ApoE-/-小鼠血脂及脂蛋白成分均未产生明显的影响。4、耐力训练对ApoE-/-小鼠血清OX-LDL水平的影响与正常对照组比较,ApoE-/-小鼠OX-LDL水平明显升高;与H组比较,HE组OX-LDL水平显著降低（P＜0.05）;与HH组比较,H+E组OX-LDL水平显著降低（P＜0.05）。提示ApoE-/-小鼠体内存在异常氧化状态和较高的OX-LDL水平,而耐力性运动能有效地减少OX-LDL的生成。5、耐力训练对ApoE-/-小鼠主动脉NF-κBmRNA及其蛋白表达的影响与正常对照组比较,ApoE-/-小鼠主动脉NF-κBmRNA及NF-κBp65均呈高度表达。与H组比较,HE组NF-κBmRNA、NF-κBp65表达强度和阳性细胞表达率均显著降低（P＜0.01）;与HH组比较,H+E组主动脉NF-κBmRNA、NF-κBp65表达强度和阳性细胞表达率均显著降低（P＜0.05）。提示ApoE-/-小鼠血管壁中NF-κBmRNA及NF-κBp65高度表达,而耐力运动可有效地抑制或降低其表达量。6、耐力训练对ApoE-/-小鼠主动脉炎症因子表达的影响与正常对照组比较,各组ApoE-/-小鼠主动脉炎症因子TNF-α、ICAM-1和MMP-9均呈高度表达,提示AS病变与炎症反应有密切关系;而耐力运动能有效地减少ApoE-/-小鼠主动脉相关炎症因子的表达。7、ApoE-/-小鼠主动脉AS斑块面积与NF-κBp65、OX-LDL的相关关系相关分析表明,ApoE-/-小鼠主动脉AS斑块面积与NF-κBp65、OX-LDL之间呈显著正相关。结论:1、14周耐力训练能有效地预防ApoE-/-小鼠AS的形成。2、12周耐力训练对ApoE-/-小鼠已经形成的AS起到了减缓其病变进展的作用。3、耐力训练防治AS的效果可能是通过下列机制发挥抗AS作用:耐力训练通过降低ApoE-/-小鼠OX-LDL水平和NF-κBmRNA的表达,进而下调参与AS形成的相关炎症因子ICAM-1和MMP-9的表达,降低了AS病灶中的炎症反应,从而起到抑制或减缓AS发展的作用,可能是运动防治AS的重要机制之一。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 引言
  • 1 文献综述
  • 1.1 AS病理学研究
  • 1.2 AS流行病学研究
  • 1.3 AS病因和发病机制研究
  • 1.3.1 AS病因的研究
  • 1.3.2 AS发病机制的研究
  • 1.4 炎症反应与AS
  • 1.4.1 炎症学说概要
  • 1.4.2 炎症反应与AS病变的进展
  • 1.4.3 AS炎症反应形成的机制
  • 1.4.4 核转录因子-κB（NF-κB）对AS炎症反应的调控作用
  • 1.4.5 炎症因子在AS发生发展中的作用
  • 1.5 AS的防治
  • 1.5.1 AS实验动物模型研究
  • 1.5.2 AS的药物干预研究
  • 1.5.3 AS的运动干预研究
  • 1.6 问题的提出及本研究的目的意义
  • 2 研究材料与方法
  • 2.1 实验动物、分组及饲养
  • 2.1.1 实验动物与分组
  • 2.1.2 动物饲养与动物实验
  • 2.2 运动方案
  • 2.3 动物取材及标本制作
  • 2.3.1 血液标本制备
  • 2.3.2 主动脉标本处理和切片制备
  • 2.3.3 主动脉冰冻切片染色
  • 2.4 检测指标与方法
  • 2.4.1 血清学指标
  • 2.4.2 主动脉病理形态学指标
  • 2.4.3 主动脉组织分子生物学指标
  • 2.4.4 小鼠体重及基本情况观察
  • 2.5 实验流程
  • 2.6 主要仪器、设备
  • 2.7 主要试剂
  • 2.8 数据统计处理
  • 3 实验结果
  • -╱-小鼠生长状况及体重的变化'>3.1 ApoE-╱-小鼠生长状况及体重的变化
  • -╱-小鼠AS形成及主动脉组织病理形态学的影响'>3.2 耐力运动对ApoE-╱-小鼠AS形成及主动脉组织病理形态学的影响
  • 57BL/6J)小鼠主动脉组织形态学特征'>3.2.1 正常对照组(C57BL/6J)小鼠主动脉组织形态学特征
  • -╱-小鼠主动脉AS斑块形成及其病理特征'>3.2.2 模型组ApoE-╱-小鼠主动脉AS斑块形成及其病理特征
  • -╱-小鼠AS斑块形成及病理变化的影响'>3.2.3 耐力训练对ApoE-╱-小鼠AS斑块形成及病理变化的影响
  • -╱-小鼠血脂的影响'>3.3 耐力训练对ApoE-╱-小鼠血脂的影响
  • -╱-小鼠血清OX-LDL水平的影响'>3.4 耐力训练对ApoE-╱-小鼠血清OX-LDL水平的影响
  • -╱-小鼠主动脉NF-κBp65mRNA及其蛋白表达的影响'>3.5 耐力训练对ApoE-╱-小鼠主动脉NF-κBp65mRNA及其蛋白表达的影响
  • 3.5.1 主动脉病变中NF-κB p65mRNA的表达
  • 3.5.2 主动脉NF-κB p65蛋白的表达
  • -╱-小鼠主动脉炎症因子表达的影响'>3.6 耐力训练对ApoE-╱-小鼠主动脉炎症因子表达的影响
  • -╱-小鼠主动脉ICAM-1表达的影响'>3.6.1 耐力训练对ApoE-╱-小鼠主动脉ICAM-1表达的影响
  • -╱-小鼠主动脉MMP-9表达的影响'>3.6.2 耐力训练对ApoE-╱-小鼠主动脉MMP-9表达的影响
  • -╱-小鼠主动脉TNF-α表达的影响'>3.6.3 耐力训练对ApoE-╱-小鼠主动脉TNF-α表达的影响
  • -╱-小鼠AS斑块面积与NF-κB表达及OX-LDL的相关关系'>3.7 ApoE-╱-小鼠AS斑块面积与NF-κB表达及OX-LDL的相关关系
  • 4 讨论
  • -╱-小鼠AS模型的建立'>4.1 ApoE-╱-小鼠AS模型的建立
  • -╱-小鼠AS的预防/治疗作用'>4.2 耐力训练对ApoE-╱-小鼠AS的预防/治疗作用
  • -╱-小鼠AS的形成'>4.2.1 耐力训练延缓ApoE-╱-小鼠AS的形成
  • -╱-小鼠AS的发展'>4.2.2 耐力训练延缓ApoE-╱-小鼠AS的发展
  • -╱-小鼠AS的机制'>4.3 耐力训练预防/治疗ApoE-╱-小鼠AS的机制
  • -╱-小鼠血脂及OX-LDL水平的影响及其在预防/治疗AS中的作用'>4.3.1 耐力训练对ApoE-╱-小鼠血脂及OX-LDL水平的影响及其在预防/治疗AS中的作用
  • -╱-小鼠主动脉NF-κB表达的影响及其在预防/治疗AS中的作用'>4.3.2 耐力训练对ApoE-╱-小鼠主动脉NF-κB表达的影响及其在预防/治疗AS中的作用
  • -╱-小鼠主动脉炎症因子表达的影响及其在预防/治疗AS中的作用'>4.3.3 耐力训练对ApoE-╱-小鼠主动脉炎症因子表达的影响及其在预防/治疗AS中的作用
  • -╱-小鼠AS机制（小结）'>4.3.4 耐力训练防治ApoE-╱-小鼠AS机制（小结）
  • 4.4 问题与展望
  • 结论
  • 参考文献
  • 附录（缩略词索引）
  • 后记（致谢）
  • 攻读学位期间科研成果

    • 相关论文文献

    • [1].草酸盐介导下含As(V)黄钾铁矾的相转化过程与As(V)的再分配行为[J]. 环境科学学报 2020(07)
    • [2].基于适配体银纳米粒子比色传感测定As(Ⅲ)的研究[J]. 分析科学学报 2020(03)
    • [3].纳米氧化铝的合成方法及其对As的吸附研究进展[J]. 功能材料 2020(08)
    • [4].三疣梭子蟹体内As的蓄积特异性研究[J]. 渔业科学进展 2020(06)
    • [5].药用植物萜类生物合成β-AS基因研究进展[J]. 吉林农业 2016(23)
    • [6].As掺杂p型碲镉汞材料的研究进展[J]. 激光与红外 2017(09)
    • [7].一种基于AS安全联盟的域间路由系统拟态防护机制[J]. 计算机科学 2017(09)
    • [8].As(Ⅲ)和As(Ⅴ)胁迫下浸矿细菌胞外多糖的变化特征[J]. 金属矿山 2016(05)
    • [9].慢性应激动脉粥样硬化动物模型和应激与AS的发生研究进展[J]. 现代生物医学进展 2016(15)
    • [10].8%井冈霉素AS防治水稻纹枯病田间药效试验[J]. 福建农业科技 2016(05)
    • [11].黑色素瘤相关抗原-As在食管鳞状细胞癌和贲门腺癌组织中的表达及其意义[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2016(04)
    • [12].微生物胞外聚合物对水中As(Ⅴ)的吸附性能研究[J]. 环境工程 2016(S1)
    • [13].长波碲镉汞材料As掺杂激活研究[J]. 激光与红外 2015(02)
    • [14].5%多抗霉素AS防治苹果斑点落叶病的防效试验[J]. 山西果树 2015(03)
    • [15].以“as”的多变用法为例窥探英语语法[J]. 中国校外教育 2014(30)
    • [16].掩不住的星光 KPL冠军AS仙阁[J]. 电子竞技 2016(24)
    • [17].色酚AS生产及其废水中有用物质回收利用的探讨[J]. 山东化工 2020(18)
    • [18].外源As（Ⅲ）、As（Ⅴ）在石灰性土壤中的转化及其对有机碳降解酶活性的影响[J]. 土壤通报 2019(06)
    • [19].老年AS性脑梗死治疗中阿托伐他汀剂量与疗效的关系研究[J]. 中国卫生标准管理 2020(04)
    • [20].载镧改性凹凸棒土对水中As(Ⅲ)的吸附特性[J]. 水资源保护 2020(05)
    • [21].基于协商的AS级多径路由机制研究[J]. 网络安全技术与应用 2016(12)
    • [22].利用天然磁黄铁矿去除水中As(V)的研究[J]. 环境科学学报 2016(10)
    • [23].基于AS和瓦片地图的虚拟校园漫游导航系统的设计与实现[J]. 电子设计工程 2015(07)
    • [24].零价铁去除饮水中砷As(Ⅲ)性能的研究[J]. 化工中间体 2015(01)
    • [25].谈谈as引导的状语从句[J]. 中学教学参考 2009(13)
    • [26].铁镧复合氧化物纳米吸附剂的制备、表征及As(Ⅲ)吸附性能研究[J]. 环境科学 2014(11)
    • [27].阴离子表面活性剂(AS)的测定方法研究[J]. 当代化工 2013(03)
    • [28].基于AS的交互式动漫电子贺卡创作技艺[J]. 辽宁科技大学学报 2013(01)
    • [29].谈用于加强语气的as状语从句的翻译技巧[J]. 辽宁师专学报(社会科学版) 2013(03)
    • [30].霜霉威AS防治马铃薯晚疫病效果试验[J]. 农业科技通讯 2012(04)

    标签：;  ;  ;  ;  ;  

    耐力训练影响ApoE-/-小鼠炎症因子表达与AS防治机制研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5