低氧预适应对自体原位肝移植大鼠肝细胞HIF-1及EGR-1表达影响的实验研究

论文摘要

1目的本实验在大鼠自体原位肝移植（AOLT）模型基础上,通过对供肝大鼠术前低氧预适应（HP）处理,探讨HP肝移植大鼠术后肝细胞的功能、结构变化,低氧诱导因子-1（Hypoxia-inducible Factor-1, HIF-1）表达与早期生长反应因子1（early growth response factor-1EGR-1）的相互关系。2方法2.1清洁SD纯系大鼠随机分为3组：低氧预适应大鼠自体原位肝移植组（A组n=36）：供体术前行HP（术前给予气体流量5L/min的含8%氧的氮氧混合气体处理90min）,8h后行大鼠自体肝移植；大鼠自体肝移植组（B组n=36）：大鼠行自体原位肝移植；正常大鼠对照组（C组n=6）。两组肝移植大鼠均采用门静脉灌注的自体原位肝移植模型。2.2比较大鼠自体肝移植术后不同时间段的指标变化。各组大鼠切取肝中叶及抽取下腔静脉血作为标本,在光镜、透射电镜下观察肝细胞病理学改变、肝细胞线粒体的损伤情况,检测肝功能指标变化,RT-PCR技术检测肝脏组织HIF-1RNA和TNF-α RNA表达的变化结果,Western蛋白印迹法检测肝脏组织EGR-1的变化结果。3结果3.1手术成功的标准是术后大鼠即刻苏醒,翻身,并能维持有效呼吸、心跳。经门静脉灌注,肝脏热缺血时间可以忽略不计（一般<5s）。无肝期结束后,A组肝脏复色均匀,红润,很快即有胆汁流出。B组较A组复色差,胆汁分泌差。3.2各组肝功能测定结果表明：术后2h A组和B组的ALT和AST值最高,术后12h及24hALT和AST值慢慢恢复正常。在各时间段中,A组的血清ALT和AST水平显著低于B组,但均显著高于C组,差异均有统计学意义（P均<0.05）。3.3光镜下术后各组肝细胞的病理变化：肝组织结构的术后2h改变,A组术后2h,肝小叶结构基本正常,肝细胞轻微肿胀,肝组织无明显改变；B组术后2h,中央静脉周围的肝细胞明显肿胀,肝细胞之间的间隙变宽,肝血窦变窄,肝小叶结构不明显,内有淤积的红细胞和血栓,周围开始出现炎症细胞浸润；C组术后2h,肝细胞结构正常,无炎症细胞浸,肝组织无明显改变。术后12h A组肝细胞肿胀略重,肝组织无明显改变；B组肝细胞水肿加剧,肝血窦明显变窄,肝小叶结构不明显,内有淤积的红细胞和血栓,周围开始出现炎症细胞浸润；C组肝细胞无明显改变。术后24h,A组肝细胞肿胀轻微好转,肝血窦变宽。B组,肝细胞明显肿胀,肝血窦变窄,肝小叶结构不明显;C组术后2h肝组织无明显改变。3.4透射电子显微镜下各组肝细胞中线粒体：术后2h,A组大鼠线粒体肿胀较轻,椭圆形,周围内质网结构尚存；B组,线粒体大小不一,明显肿胀,呈类圆形；术后12h,A组大鼠线粒体肿胀略加重,内嵴部分断裂,但仍有少量排列。周围内质网结构尚存；B组线粒体肿胀加剧,严重者者可见嵴减少、断裂或消失,周围内质网结构破坏;术后24h,A组大鼠线粒体肿胀略轻,损坏未加剧,周围内质网结构尚存；B组线粒体肿胀加剧,内有空泡变性,可见嵴断裂或消失严重；3.5HIF-1RNA表达结果：C组中肝组织见少量HIF-1a的表达,各时间段无明显波动；B组因术中灌肝缺氧致有HIF-1α RNA表达,可见表达量介于对照组和低氧预适应组,术后表达量波动增强不明显；而A组因术前低氧诱导致HIF-1RNA的表达比B组和C组更明显,其表达量见表一：术后1小时HIF-1α-GAPDH为0.82,之后持续升高,6小时HIF-1/GAPDH最高为1.25（误差率<5%）。3.6TNF-α RNA表达结果：C组中肝组织见少量TNF-α的表达,各时间段无明显波动；A组TNF-α RNA表达,可见表达量介于对照组和低氧预适应组；而B组TNF-α RNA的表达比低氧预适应大鼠自体肝移植组和对照组更明显（P<0.05）,与Egr-1蛋白表达呈正相关。其表达量见：术后2小时TNF-α/GAPDH为0.77,之后持续升高,24小时TNF-α/GAPDH最高为1.44（误差率<5%）。3.7Western蛋白印迹检测：C组检测到Egr-1蛋白表达量较少。B组和A组的Egr-1蛋白表达量术后都增多,其中B组明显增多。Egr-1的W B数据显示：B组因术中肝脏缺血等损伤致Egr-1移植后12h即有明显表达增多,Egr-1/action为0.78,移植后24h其表达增至最高值Egr-1/action为1.005。至48小时A组和C组的Egr-1蛋白表达量明显开始下降,而B组的表达量虽有所下降,但仍较高。4结论在低氧预适应大鼠自体肝移植中,HIF-1适度调节Egr-1的生成,保护移植肝的组织学结构、抵御缺血再灌注损伤,促进肝细胞再生及移植肝功能的恢复。Egr-1适度表达能否作为临床治疗肝脏疾病及移植损伤后功能恢复的一项有用指标,有待进一步研究。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 第一章 引言
• 参考文献
• 第二章 低氧预适应大鼠自体原位肝移植模型的建立及技术改进
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第三章 低氧预适应对自体肝移植大鼠肝细胞HIF-1及EGR-1表达的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述：早期生长反应因子-1在肝脏损伤机制中的研究进展
• 参考文献
• 综述：肝源性胸腔积液的诊疗进展
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的文章
• 参与科研及学术活动