RNAi沉默Twist基因对人胃癌细胞生物学行为的影响及其机制的研究

论文摘要

胃癌是消化系统最为常见的恶性肿瘤,恶性程度高。在当前缺乏有效的一级预防措施的情况下,早期诊断尤为困难,造成根治机会少,五年生存率低。研究结果显示,Twist基因的高表达与多种肿瘤的发生、发展及侵袭进程密切相关,然而,它与胃癌发生发展的具体相关关系目前尚未阐述清楚。本研究应用免疫组化法检测了Twist基因在胃癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系,并进一步以人胃腺癌SGC7901细胞系为对象,利用RNAi技术沉默Twist基因的表达,观察其对人胃腺癌细胞恶性生物学行为的影响并探讨其可能的作用机制。研究提示:针对Twist基因表达产物的检测,将对胃癌的恶性程度及侵袭性提供一个有意义的判断指标。沉默胃癌细胞中Twist蛋白的表达,能抑制肿瘤细胞的生长,Twist可能成为胃癌基因治疗的潜在靶点。

论文目录

• 提要
• 英文缩略词表
• 前言
• 第1篇 文献综述
• 第1章 肿瘤基因治疗
• 第2章 细胞凋亡
• 1 凋亡的定义
• 2 细胞凋亡的形态学特征
• 3 细胞凋亡的生化改变
• 4 细胞凋亡的机理
• 5 细胞凋亡的检测手段
• 第3章 Twist 与肿瘤
• 第4章 RNAi 在胃癌治疗中的应用
• 1 RNAi 概述
• 2 RNAi 的发现
• 3 RNAi 的发展历程
• 4 RNAi 的组成
• 5 RNA 干扰的机制
• 6 RNAi 的特征
• 7 RNAi 在肿瘤基因治疗中的应用
• 8 存在问题及前景
• 9 RNAi 治疗胃癌的研究进展
• 第2篇 实验研究
• 第1章 Twist 在胃癌组织中的表达及其同临床指标之间的关系
• 第1节 前言
• 第2节 实验材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 统计学处理
• 第3节 实验结果
• 1 Twist 在正常胃组织及胃癌组织中的表达情况
• 2 RT-PCR 检测Twist 在人胃癌细胞中基因表达情况
• 3 Western blot 检测人胃癌SGC7901 细胞中Twist 蛋白表达情况
• 第4节 讨论
• 第2章 Twist-siRNA 载体的构建、鉴定及在人胃癌细胞中沉默效果的检测
• 第1节 前言
• 第2节 实验材料和方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 第3节 实验结果
• 1 pGensil-2/Twist 重组载体的鉴定
• 2 细胞培养、稳定转染细胞株的筛选
• 3 RT-PCR 检测胃癌细胞中Twist 基因沉默效果
• 4 Western blot 检测胃癌细胞中Twist 基因沉默效果
• 第4节 讨论
• 第3章 Twist 基因沉默对SGC7901 细胞生长、凋亡的影响及其机制探讨
• 第1节 前言
• 第2节 实验材料与方法
• 1 实验材料及试剂
• 2 实验方法
• 第3节 实验结果
• 1 光镜下细胞形态观察
• 2 透射电镜下各组细胞的超微结构观察
• 3 各组细胞生长曲线测定
• 4 细胞周期检测
• 5 细胞凋亡DAPI 染色
• 6 TUNEL 法检测细胞凋亡
• 7 AnnexinV FITC/PI 染色激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况
• 8 流式检测细胞凋亡的结果
• 9 流式细胞术对各组细胞线粒体跨膜电位的测定
• 10 Twist 基因沉默对SGC7901 细胞caspase3 和caspase 9 活性的影响
• 11 Twist 基因沉默对SGC7901 细胞p53 蛋白表达的影响
• 12 Twsit 基因沉默对SGC7901 细胞Bcl-2 和Bax 蛋白表达影响
• 13 Twist 基因沉默对SGC7901 细胞Ca2+含量的影响
• 第4节 讨论
• 第4章 转染siRNA-Twist 基因后对SGC7901 细胞迁移、侵袭的影响及机制的初步探讨
• 第1节 前言
• 第2节 实验材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 第3节 实验结果
• 1 软琼脂集落形成实验
• 2 肿瘤细胞与基质胶之间粘附性的测定
• 3 Twist 基因沉默对细胞铺展能力的影响
• 4 细胞划痕实验检测Twist 基因沉默对人胃癌细胞SGC7901在细胞外基质成份上迁移能力的影响
• 5 Boyden 小室侵袭、迁移能力检测
• 6 Balb/c 小鼠肾被膜下移植侵袭模型
• 7 明胶酶谱检测Twist 基因沉默对基质金属蛋白酶活性的影响
• 第4节 讨论
• 第3篇 结论
• 参考文献
• 攻读博士期间发表的论文
• 致谢
• 中文摘要
• Abstract