PSP对PBMC免疫调节机制及TRAF6/TLR免疫信号转导通路的研究

论文摘要

目的:云芝,为多孔菌科真菌,彩绒革盖菌（ Coriolus versicolor, C. versicolor ）的子实体或菌丝体,云芝糖肽（ polysaccharopeptide,PSP ）为云芝菌株菌丝体培养物提取的生物活性物质。目前,PSP在临床上主要用于辅助放化疗,促使放化疗后损伤的机体恢复免疫机能。本课题是在课题组前期工作基础上,采用蛋白芯片检测PSP对健康成人外周血单个核细胞（peripheral blood monouclear cells,PBMC ）分泌细胞因子的影响,并从基因水平和蛋白水平检测Toll-like受体（ Toll-like receptors ,TLR ）信号转导途径中的关键节点的mRNA表达水平和/或蛋白表达水平,从而探索PSP的免疫信号转导机制,进一步验证和探讨PSP免疫信号转导通路。1方法:体外采用Ficoll液密度梯度离心法分离PBMC,分为PSP组和对照组。PSP组加入终浓度为25μg/ ml的PSP药液及终浓度为100μg/ ml的植物血凝素（ Phytohemagglutinin, PHA ）,对照组只加终浓度为100μg/ ml的PHA。应用蛋白芯片检测PSP作用于PBMC后分泌细胞因子的变化。并采用RT-PCR、Western blot等方法,从mRNA和/或蛋白水平研究PBMC经PSP作用后,TLR信号转导途径中的关键节点,如:含TIR接头分子（ TIR-containing adaptor molecule,TRIF ）,TRIF相关接头分子（ TRIF-related adaptor molecule,TRAM ）,肿瘤坏死因子受体相关因子6 （ TNF-receptor associated factor,TRAF6 ）,髓样细胞分化因子88 （ Myeloid different factor 88,MyD88 ）,MyD88接头样蛋白（ MyD88 adaptor-like protein,MAL）以及核转录因子-κB （ nuclear factorκB,NF-κB ）等的表达水平。结果:在芯片所包含的23种细胞因子中,PSP组与对照组相比上调≥1.3倍的细胞因子有5个:G-CSF,GM-CSF,IL-1α,IL-6,IFN-γ;有所降低的因子有3个:IL-2,IL-3,IL-5,对其他细胞因子的表达没有显著影响。TLR信号通路中,PSP组与对照组相比,TRAM、TRAF6 （ P < 0.05 ）和NF-κB （ P < 0.01 ） mRNA水平显著增高,TRIF mRNA水平有所增高,MAL、MyD88 mRNA水平有所降低;TRAF6、TRAM和NF-κB蛋白表达水平显著增高（ P < 0.01 ）,MyD88蛋白表达水平显著降低（ P < 0.01 ）。结论:PSP可以调节免疫细胞的细胞因子分泌;TLR信号通路中的MyD88依赖和TRIF依赖两条通路在PSP免疫信号转导中均发挥作用,其中以TRIF依赖途径即TRAM-TRIF-TRAF6通路为主,表明TRAF6/TLR途径可能是PSP免疫调节的重要信号转导通路之一。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 蛋白芯片检测PSP 作用于PBMC 后分泌细胞因子的变化
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二部分 验证PSP 对TLR 免疫信号转导途径中关键节点的m RNA 及蛋白表达水平的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 结论
• 文献综述
• 致谢
• 硕士期间发表的论文
• 获奖情况