血管紧张素转换酶抑制剂对醛糖还原酶的抑制作用

论文摘要

醛糖还原酶（aldose reductase,AR）,是治疗糖尿病并发症的靶位酶。醛糖还原酶抑制剂（aldose reductase inhibitor,ARI）通过抑制多元醇通路有效地防治糖尿病并发症。血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI,angiotensin-converting enzyme inhibitors）是目前能有效逆转高血压心血管重塑的药物,ACEI也可能通过抑制AR发挥逆转心血管重塑的作用,但国内外均未见相关研究报道。目的:旨在查明ACEI类药物卡托普利、赖诺普利、贝那普利、雷那普利对醛糖还原酶的作用以及卡托普利、赖诺普利对SHR大鼠心肌AR活性的影响。方法:（1）从牛眼晶状体中提取制备醛糖还原酶,采用优化的测定方法测定醛糖还原酶活性。采用Brad-ford染色法测定AR粗酶蛋白质浓度,Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析AR粗酶。以DL-甘油醛为底物,NADPH为辅酶,首先将除底物DL-甘油醛以外的其它组分混合,置于25℃保温10分钟,然后加入5 mmol·L-1底物DL-甘油醛启动酶促反应,在25℃下连续监测340 nm处反应体系吸光度的变化5分钟。规定25℃下反应体系吸光度每分钟下降0.001为一个酶活力单位（AU）。以不含底物的样品为空白对照。我们维持其它组分浓度不变,分别改变NADPH的浓度、底物DL-甘油醛的浓度、AR酶量,观察它们对醛糖还原酶酶促反应体系的影响。（2）体外实验以依帕司他为阳性对照,比较卡托普利、赖诺普利、贝那普利、雷那普利对醛糖还原酶的抑制作用。采用优化的醛糖还原酶酶促反应体系测定AR活性。（3）在体实验,紫外分光光度法测定卡托普利、赖诺普利对SHR心肌AR活性的影响。18只SHR随机分为3组,每组6只:蒸馏水（阴性对照）、卡托普利(50 mg·kg-1·d-1)、赖诺普利(20 mg·kg-1·d-1),采用放射免疫法测定血浆中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的含量。结果:1.NADPH浓度、底物DL-甘油醛浓度、AR酶量均可影响醛糖还原酶的催化活性。优化后醛糖还原酶酶促反应体系为:NADPH浓度为0.25 mmol·L-1、底物DL-甘油醛浓度为2 mmol·L-1、AR(浓度为41μg·μL-1),酶量为40μL。2.体外研究表明卡托普利、赖诺普利、贝那普利、雷那普利均对AR活性有抑制作用,且有量-效关系。与阴性对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）。3.在体研究表明,卡托普利和赖诺普利喂养的SHR大鼠心肌中AR活性值分别为0.032±0.012和0.042±0.010 AU,与对照组（0.092±0.010）AU相比较,活性下降显著,差异均有统计学意义（P＜0.05）;且AR活性与AngⅡ浓度具有相关性（R=0.695,P=0.004）。结论:1.建立了优化的醛糖还原酶活性测定方法。2.血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利、赖诺普利、贝那普利、雷那普利均可抑制AR活性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 醛糖还原酶活性测定方法的建立与优化
• 前言
• 1.仪器、试剂、溶液配制
• 1.1 仪器
• 1.2 试剂
• 1.3 溶液配制
• 1.4 其它材料
• 2.实验方法
• 2.1 醛糖还原酶的初步提取、分离和保存
• 2.2 Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 2.3 Brad-ford染色法测定蛋白浓度
• 2.4 醛糖还原酶（AR）酶活性测定方法的建立
• 2.5 ACEI类制剂初筛样品的制备
• 2.6 醛糖还原酶抑制剂的筛选
• 3.结果与讨论
• 3.1 醛糖还原酶的初步提取、分离和保存
• 3.2 Brad-ford染色法测定AR粗酶蛋白质浓度
• 3.3 Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析AR粗酶
• 3.4 醛糖还原酶（AR）酶活力测定方法的建立
• 3.5 醛糖还原酶（AR）酶促反应体系的优化
• 第二章 血管紧张素转换酶抑制剂对醛糖还原酶的抑制作用
• 前言
• 1.实验仪器、材料
• 1.1 仪器
• 1.2 试剂
• 1.3 溶液配制 同第一部分
• 2.实验动物
• 3.实验方法
• 3.1 ACEI对醛糖还原酶的抑制作用
• 3.2 卡托普利、赖诺普利对高血压心肌组织AR活性及血浆活性物质Ang Ⅱ浓度的影响
• 4.结果
• 4.1 ACEI对醛糖还原酶抑制作用的研究
• 4.2 卡托普利、赖诺普利对高血压心肌组织AR活性的影响
• 5.讨论
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的主要研究成果
• 致谢