脂蛋白循环免疫复合物致动脉粥样硬化作用机制研究

论文摘要

本文从多个角度研究了脂蛋白[低密度脂蛋白和脂蛋白（a）]特异性循环免疫复合物（IC）在动脉粥样硬化（As）中作用。采用人源的氧化、天然脂蛋白与异源的IgG结合制备ICs。ICs与单核巨噬细胞作用,观察ICs致巨噬细胞泡沫化的形态变化以及细胞内胆固醇酯水平的变化;ICs与U937细胞作用24h后,用半定量RT-PCR检测ICs对细胞基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和组织金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）mRNA表达;采用ICs与U937细胞作用,观察ICs对细胞中bax和bcl-2 mRNA表达的影响。研究发现,ICs组能使巨噬细胞转化为泡沫细胞,细胞内胆固醇酯较对照组和天然、氧化组明显增加,且其增加值具有剂量效应;ICs组可以使U937细胞中MMP-1 mRNA表达增强,而氧化脂蛋白和氧化循环免疫复合物组降低TIMP-1 mRNA的表达,其作用亦具有剂量效应;氧化脂蛋白和氧化循环免疫复合物抑制bcl-2基因的表达,促进bax基因的表达,使bax和bcl-2的比值加大。得出结论:ICs可以从诱导巨噬细胞转化为泡沫细胞、诱导巨噬细胞内胆固醇酯堆积、增强MMP-1表达和降低TIMP-1表达、促进bax表达和抑制bcl-2表达方面引起和加剧As的发生。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 绪论
• 1.1 脂蛋白与AS
• 1.2 基质金属蛋白酶与AS
• 1.3 细胞凋亡与AS
• 1.4 本文研究内容
• 2 实验仪器与药品
• 2.1 实验仪器
• 2.2 化学试剂
• 2.3 实验所需部分试剂的配制
• 3 脂蛋白循环免疫复合物的制备
• 3.1 实验方法
• 3.1.1 LDL的提取
• 3.1.2 Lp（a）的提取
• 3.1.3 脂蛋白琼脂糖电泳
• 3.1.4 蛋白定量
• 3.1.5 脂蛋白的氧化
• 3.1.6 循环免疫复合物的制备
• 3.2 实验结果
• 3.2.1 Lp（a）洗脱曲线
• 3.2.2 Lp（a）纯度
• 3.2.3 脂蛋白氧化度
• 4 巨噬细胞内胆固醇酯蓄积及泡沫细胞形成
• 4.1 实验方法
• 4.1.1 细胞培养
• 4.1.2 细胞计数
• 4.1.3 细胞染色
• 4.1.4 胆固醇含量测定
• 4.1.5 细胞蛋白含量测定
• 4.1.6 统计学处理
• 4.2 实验结果
• 4.2.1 天然、氧化LDL及其循环免疫复合物致泡沫细胞形成
• 4.2.2 天然、氧化Lp（a）及其循环免疫复合物致泡沫细胞形成
• 4.2.3 天然、氧化LDL及其循环免疫复合物对巨噬细胞CE蓄积的影响
• 4.2.4 天然、氧化Lp（a）及其循环免疫复合物对巨噬细胞CE蓄积的影响
• 4.2.5 天然、氧化LDL-IC致巨噬细胞胆固醇酯堆积的剂量效应
• 4.2.6 N-Lp（a）-IC致巨噬细胞胆固醇酯堆积的剂量效应
• 4.3 讨论
• 5 U937细胞中MMP-1、TIMP-1MRNA表达
• 5.1 实验方法
• 5.1.1 细胞培养
• 5.1.2 细胞总RNA提取
• 5.1.3 RT-PCR
• 5.1.4 琼脂糖凝胶电泳
• 5.1.5 统计学处理
• 5.2 实验结果
• 5.2.1 天然、氧化LDL及其循坏免疫复合物对MMP-1和TIMP-1mRNA表达的影响
• 5.2.2 天然、氧化LDL及其循环免疫复合物影响MMP-1mRNA表达的剂量效应
• 5.2.3 天然、氧化LDL及其循环免疫复合物影响TIMP-1mRNA表达的剂量效应
• 5.2.4 天然、氧化Lp（a）及其循环免疫复合物对MMP-1和TIMP-1mRNA表达的影响
• 5.2.5 天然、氧化Lp（a）及其循环免疫复合物影响MMP-1mRNA表达的剂量效应
• 5.2.6 天然、氧化Lp（a）及其循环免疫复合物影响TIMP-1mRNA表达的剂量效应
• 5.3 讨论
• 6 U937细胞凋亡
• 6.1 实验方法
• 6.2 实验结果
• 6.2.1 天然、氧化LDL及其循环免疫复合物对bax和bcl-2基因表达的影响
• 6.2.2 天然、氧化Lp（a）及其循环免疫复合物对bax和bcl-2基因表达的影响
• 6.3 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献