论文摘要
目的：评价基于Luminex XMAP系统的液相基因芯片技术的检测灵敏度和特异度及其在女性生殖道人乳头状瘤病毒（HPV）感染检测中的临床价值，初步调查山东地区女性生殖道HPV感染情况及常见HPV基因型。方法：1．Luminex XMAP液相基因芯片在人乳头状瘤病毒（HPV）DNA检测中的特异度、灵敏度验证根据GeneBank公布的最新的HPV基因组序列，定量配制标准品质粒。在确定优化的检测条件下，应用Luminex XMAP液相基因芯片各型探针对一系列不同稀释度标准品（5拷贝／5ul，10拷贝／5ul，20拷贝／5ul，50拷贝／5ul）进行6次重复检测以确定其检测灵敏性；对正常人基因组标准品的检测以确定其检测特异性。2．Luminex XMAP液相基因芯片在女性生殖道人乳头状瘤病毒（HPV）感染检测中的临床价值评价取福尔马林固定石蜡包埋宫颈组织标本231例和正常宫颈脱落细胞33例，采用26种基因型液体芯片技术和杂交捕获（HC）Ⅱ对所有标本进行HPV DNA检测，比较两种方法HPV检测结果的符合情况，对所有不一致标本及HPV单一型感染标本进行基因测序以鉴定液体芯片分型准确性。3．应用Luminex XMAP液相基因芯片技术筛查山东地区高危人群人乳头瘤状病毒基因型取妇科门诊就诊者宫颈脱落细胞2925例，采用液相芯片技术进行HPV基因型检测。639例患者同时做病理诊断，按组织病理学分为细胞学正常组、炎症组、宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ组、CINⅠ-Ⅱ组、CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组。通过HPV-DNA亚型分布结合病理诊断，分析山东地区HPV感染基因型与宫颈病变程度的关系。结果：1．对于浓度在10拷贝／5ul以及以上的浓度的阳性参比品检测结果均为阳性，对于浓度为5拷贝／5ul的阳性参比品检测结果显示，只有HPV16和HPV18均为阳性，但对于其它24型的阳性参比品的6次平行检测至少有一次显示为阴性，因此液相芯片检测HPV DNA的下限为10拷贝／5ul。Luminex XMAP液相基因芯片对正常基因组参比品检测结果为阴性，特异度和灵敏度均较高。2．应用液相基因芯片技术和杂交捕获（HC）Ⅱ对标本进行HPV DNA检测，两种方法检测结果一致性极好（Kappa=0.8889），正常组、CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组Kappa值依次为1、0.8372、0.6411和0.6540。所有液相芯片检出的单一型经基因测序验证准确率为99.00％。3．HPV总感染率36.0％（1，054／2，925），26种基因型检出23种，按感染率从高到低依次为：HPV-16（26.75％），HPV-52（25.75％），HPV-58（10.47％），HPV-18（8.87％）和HPV-11（6.94％）等。其中高危型感染占87.32％，低危型13.68％；单一型感染698例（66.22％），多重感染356例（33.78％），低危型11、6多与高危型多重感染。1054例HPV阳性患者中，261例（24.8％）为21-25岁女性，随年龄增大阳性例数减少，52例（4.9％）为51-67岁女性。各病理组HPV阳性率及多重感染率依次为：正常组23.37％、4.89％，炎症组33.08％、7.14％，CINⅠ组54.54％、18.18％，CINⅠ-Ⅱ组57.14％、28.57％，CINⅡ组82.61％、41.30％，CINⅢ组91.30％、43.37％，宫颈癌组100％、38.46％。以组织病理学为确诊标准，液相芯片HPV DNA检测CINⅡ、Ⅲ和宫颈癌的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值依次为88.57％，76.63％，68.89％，92.16％。结论：1．在国内率先将Luminex XMAP液相基因芯片技术引入女性生殖道人乳头状瘤病毒基因型检测并对其检测灵敏度、特异度和临床价值作出评价。2．首次对山东地区高危人群HPV感染情况及常见HPV基因型进行检测分析，为山东地区宫颈病变临床诊断及疫苗研究等提供流行病学资料。3．所选山东地区高危人群HPV感染的常见基因型是16、52、58、18、11、6、56、31。随宫颈病变程度加重HPV感染率及多重感染有增加趋势，HPV阳性者年轻女性多见。4．Luminex XMAP液相芯片HPV DNA检测具有较高的灵敏度和特异度，在宫颈病变临床诊断及HPV分型检测中有重要价值，是大规模筛查的理想方法。