论文摘要
目的：以红景天粉末为发酵基质,红景天苷含量为指标,筛选益生菌进行微生物发酵,通过优化发酵条件增加红景天中主要活性成分红景天苷的含量,采用HPLC色谱法测定红景天苷含量,并考察了发酵红景天的抗疲劳活性,通过抗氧化系统和能量代谢系统研究其抗疲劳机制,为红景天的功效分析和抗疲劳药物的开发提供实验基础。方法：发酵菌株活化复壮,接种后测定发酵液的pH值、活菌数目,判定发酵菌株的生长状况,采用重氮盐比色法初步测定红景天苷的含量,筛选出能增加红景天苷含量的菌株,通过单因素试验,初步考察了固液比、接种量、初始pH值、培养时间、培养温度和碳、氮源对红景天发酵的影响。在单因素试验的基础上,选择固液比、接种量、初始pH值和培养时间四个因素进行正交试验设计,优化红景天的发酵条件。采用HPLC色谱法,对经过浓缩、冷冻干燥的红景天提取物和红景天发酵物进行含量测定,色谱条件为：色谱柱为Kroasil C18分析柱（4.6mm×250mm,5μm）,乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为276 nm,柱温为25℃,进样量为20μL。最后对红景天发酵物的抗疲劳作用进行了研究：昆明种雄性小鼠随机分为三组：FR组（发酵红景天组,1.5 g/kg.d）、RE组（红景天提取物组,1.5 g/kg.d）、CG组（生理盐水对照组）。每只小鼠按0.2m1/10 g每天灌胃给药一次,连续15天。测定以下各项指标：实验前后体重的变化,力竭游泳时间,力竭运动后肝脏中超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性以及丙二醛（MDA）含量,运动后血尿素氮（BUN）含量、肝糖原含量、血乳酸（LD）含量以及乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果：筛选得到的红景天发酵菌株是噬酸乳杆菌（L1）。红景天发酵的最佳工艺条件为：红景天粉末与水1：15混合,添加1%蛋白胨、2%葡萄糖,调节初始pH为6.0,121℃高压蒸汽灭菌15 min,按1%接种量接种L1,37℃下静置培养48 h。发酵红景天中红景天苷的含量是2.39%,红景天提取物1.61%,说明通过微生物发酵使得活性成分红景天苷含量增加了48.45%。发酵红景天（FR）、红景天提取物（RE）对小鼠体重增长无明显影响；FR、RE具有延长小鼠力竭游泳时间、提高运动能力延缓疲劳产生的作用,同等剂量下FR的抗疲劳活性优于RE；FR可以提高小鼠力竭运动后抗氧化酶（SOD、GSH-PX）的活性,降低脂质过氧化产物MDA的含量；FR可以降低小鼠运动后BUN的含量,对于增加糖原储备的作用不明显；FR可以增强小鼠运动后LDH的活性,加速血液中LD的清除。结论：1.菌株和培养条件对红景天的微生物转化有很大的影响。在优化的条件下,活性成分红景天苷含量增加了48.45%。2.论文中所采用的重氮盐比色法可初步测定红景天苷的含量,比HPLC色谱法测定的结果偏大,但因其方法简便易行,故可作为红景天发酵过程中初筛的方法,HPLC色谱法作为含量测定方法具有快速、准确的优点。3.红景天发酵物具有较好的抗疲劳及抗氧化活性,其作用机制有待于进一步深入的研究,因此研究和开发红景天发酵物保健食品及药品具有一定的价值。