三株生防细菌对花生寄生曲霉的拮抗作用及促进花生萌发新菌株的筛选

论文摘要

花生是重要的油用、食用型经济作物,含有丰富的脂肪、蛋白质和维生素,具有很高的食用价值。我国是最大的花生生产国,花生产量约占世界的五分之二。花生种植、收获及储藏过程中易受真菌侵染产生黄曲霉毒素（Aflatoxin, AFT）,特别是南方的温暖潮湿气候十分有利于黄曲霉毒素的产生,从而使花生品质受到严重影响。黄曲霉毒素具有极强的毒性,具有诱导突变、抑制免疫和致癌作用,是导致肝癌的主要因素之一,对人类健康和环境造成了极大的危害。自上世纪60年代发现黄曲霉毒素危害以来,国内外学者对黄曲霉毒素相关领域做了大量的研究工作。近年来利用环境友好型生物防治技术已经受到各国政府和科学家的青睐,各国科学家纷纷采用生物学方法进行黄曲霉毒素防治策略的研究。研究主要包括培育黄曲霉毒素抗性作物品种,利用其它微生物的竞争、拮抗作用抑制产毒菌株的生长,从植物源或微生物发酵液中提取抗菌活性物质以抑制黄曲霉生长和产毒,已经取得了初步的成效。本实验室致力于用微生物方法防治黄曲霉毒素污染,已经分离出多株对黄曲霉毒素产生菌有显著抑制作用的生防细菌。本研究利用拮抗效果较好的三株细菌B5、LN和04接种花生,观察其对花生寄生曲霉侵染的抑制作用及对花生萌发的影响,并从其它抗黄曲霉毒素生防细菌中筛选出对花生萌发有促进作用的新菌株。首先将三株细菌发酵后制成菌悬液,用108,109,1010cfu ml-1三种浓度菌悬液浸种处理,在0.8%的琼脂平板上进行花生萌发实验,发现三种浓度04浸种均能促进花生萌发,109cfu ml-1处理促进效果最明显。1010cfu ml-1 B5和LN浸种显著抑制了花生萌发,108cfu ml-1和109cfu ml-1浓度B5和LN浸种无抑制作用,于是采用109cfu ml-1浓度的三株细菌进一步做琼脂平板花生寄生曲霉拮抗实验。拮抗实验表明,04在0.8%的琼脂平板条件下对寄生曲霉表现理想的拮抗效果,LN和B5对寄生曲霉没有拮抗作用。同时,采用1010cfu ml-1三株细菌浸种后于土培实验条件下进行花生萌发实验与寄生曲霉拮抗实验,结果显示,04一定程度上促进了根系发育,LN处理组幼苗生物质积累有所提高,B5显著延迟花生萌发并抑制花生前期生长;三株细菌对花生果实及土壤中寄生曲霉均表现抑制作用,其中04对花生果实及果壳附近土壤中寄生曲霉抑制效果最好,LN对根系土壤中寄生曲霉拮抗作用明显。另外,从其它黄曲霉毒素生防细菌中筛选出三株显著促进花生萌发的新菌株,分别为N1KM1、WPS2和WGB3,三株细菌均为革兰氏阳性。其中N1KM1和WGB3为棒状杆菌,WPS2为球菌。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 花生的营养价值及用途
• 1.1.1 花生的营养价值
• 1.1.2 花生用途
• 1.2 我国花生黄曲霉毒素污染及危害
• 1.2.1 黄曲霉毒素的危害
• 1.2.2 黄曲霉毒素的分子结构和理化性质
• 1.2.3 黄曲霉毒素的合成途径
• 1.2.4 黄曲霉毒素的检测
• 1.3 国内外研究现状及分析
• 1.3.1 生物防治技术的应用
• 1.3.2 生物防治黄曲霉毒素污染存在的问题及本研究的意义
• 1.4 课题来源及研究内容和意义
• 1.4.1 课题来源
• 1.4.2 研究目的
• 1.4.3 研究内容
• 第2章 三株生防细菌对花生萌发的影响
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 实验主要仪器
• 2.1.2 实验材料
• 2.1.3 实验方法
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 菌体浓度与OD值的对应关系
• 2.2.2 发酵液对花生萌发的影响
• 2.2.3 无菌水菌悬液对花生萌发的影响
• 2.2.4 三株细菌对盆栽花生的影响
• 2.3 本章小结
• 第3章 三株生防细菌对花生寄生曲霉抑制作用
• 3.1 实验材料与方法
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验方法
• 3.2 结果分析与讨论
• 3.2.1 接种时间对寄生曲霉生长的影响
• 3.2.2 无菌水菌悬液对寄生曲霉孢子萌发的影响
• 3.2.3 三株细菌对花生生长的影响
• 3.2.4 三株细菌对花生寄生曲霉及其它真菌的拮抗作用
• 3.3 本章小结
• 第4章 促进花生萌发生防细菌的筛选
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 实验材料
• 4.1.2 实验方法
• 4.2 结果分析与讨论
• 4.2.1 花生萌发实验
• 4.2.2 初步形态鉴定
• 4.3 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢