隐性乳房炎奶牛乳腺上皮细胞凋亡检测及相关差异分析

论文摘要

为了观察隐性乳房炎奶牛泌乳期上皮细胞凋亡变化,为了对隐性乳房炎奶牛乳腺的免疫应答机制的研究,为隐性乳房炎发病的机制和治疗提供科学参考和依据,本试验经鉴定筛选取18头产能相似的患有隐性乳房炎黑白花奶牛,分别在未妊娠、分娩后第8d,20d,120d,240d,300d采取乳腺组织。应用免疫组化方法检测凋亡因子caspase3、bcl-2、bax表达,流式细胞术定量分析凋亡细胞,同时分别选取健康奶牛和隐性乳房炎奶牛,在分娩后第2d,8d,20d,40d等16个泌乳时间点进行泌乳量测定,每一时间点选10头奶牛。免疫组化caspase3和流式细胞结果与健康奶牛数据差异分析以及泌乳量差异分析,健康奶牛数据取自本教研室。试验结果:（1）Caspase3表达结果:阳性细胞呈棕黄色。未妊娠期、分娩后240d分别与其他各时期阳性表达率具有极显著差异（P<0.01）,8d和300d没有显著差异（P>0.05）,20d和120d没有显著差异（P>0.05）,与其他时期呈极显著差异（P<0.01）;与健康奶牛同期比较显示:在分娩后8d、20d阳性率细胞同期比较有极显著差异（P<0.01）;未妊娠期、分娩后120d、240d和300d阳性细胞表达同期比较呈显著差异（P<0.05）。（2）凋亡因子bax阳性表达:阳性细胞显棕黄色。未妊娠期阳性表达量最高,分娩后20d阳性表达量最低;分娩后20d与120d阳性表达量无显著差异（P>0.05）,与其他各期呈极显著差异（P<0.01）;未妊娠期、分娩后8d、240d、300d四个时期之间阳性率表达呈极显著差异（P<0.01）。（3）凋亡因子bcl-2阳性表达:未妊娠期和分娩后300d阳性率表达都与其他时期呈极显著差异（P<0.01）;分娩后20d与120d阳性表达无显著差异（P>0.05）,分娩后8d与240d阳性率无显著差异（P>0.05）,与其他各期呈极显著差异（P<0.01）。（4）流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示:隐性乳房炎奶牛未妊娠期和分娩后300d乳腺上皮细胞凋亡率分别与其他各时期乳腺上皮细胞凋亡率都呈极显著差异（P<0.01）;分娩后8d和240d无显著差异（P>0.05）,与其他时期呈极显著差异（P<0.01）;分娩后20d和120d无显著差异（P>0.05）。与健康奶牛组同期比较显示:未妊娠期无显著差异（P>0.05）,分娩后8d、20d呈极显著差异（P<0.01）,其他时期有显著差异（P<0.05）。（5）健康奶牛和隐性乳房炎奶牛泌乳量的测定表明:隐性乳房炎奶牛泌乳量比健康奶牛泌乳量显著下降,除泌乳2d、8d、80d、100d泌乳量下降无显著差异（P>0.05）,其余时间点泌乳量下降呈极显著差异（P<0.01）。结论说明:免疫组织化学和流式细胞仪检测隐性乳房炎奶牛上皮细胞凋亡数量与健康奶牛对比表明,隐性乳房炎的发生导致乳腺上皮细胞损伤,促使乳腺上皮细胞凋亡的明显增加,并且不同泌乳时期都高于健康值。免疫组织化学检测凋亡因子Bax与bcl-2表明,不同泌乳时期两者变化具有一定的协调抑制关系,提示Bax和bcl-2凋亡因子参与隐性乳房炎奶牛乳腺细胞凋亡过程,并且对乳腺细胞凋亡具有一定的调控作用。隐性乳房炎奶牛泌乳量与健康奶牛比较显示,隐性乳房炎奶牛各时期泌乳量显著低于健康奶牛泌乳量,说明隐性乳房炎的乳腺上皮细胞大量凋亡,直接影响奶牛乳腺的泌乳功能,导致奶牛泌乳量的降低,造成一定经济损失。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 奶牛乳房炎研究概述
• 1.2 奶牛乳腺上皮细胞
• 第二章 乳腺凋亡基因免疫组织化学检测及caspase3 差异分析
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 第三章 流式细胞仪定量分析乳腺上皮细胞凋亡及差异分析
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 第四章 泌乳量测定及差异分析
• 4.1 材料与方法
• 4.2 试验结果
• 4.3 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录
• 附图
• 作者简历