胰岛素对人乳腺癌细胞株化疗增效作用的体外研究

论文摘要

[目的]探讨用胰岛素提高肿瘤细胞生长代谢水平对化疗药物顺铂（DDP），阿霉素（ADM），氟尿嘧啶（5-Fu），足叶乙甙（Vp-16），盖诺（NVB）敏感性的影响和机制，为临床应用实验依据。[方法]以体外培养的人乳腺癌细胞株（MDA-MB-453）为靶细胞，以胰岛素作为代谢促进剂，运用四氮唑盐、直接细胞计数等方法观察化疗药物顺铂（DDP），阿霉素（ADM），氟尿嘧啶（5-Fu），足叶乙甙（Vp-16），盖诺（NVB）与胰岛素对MDA-MB-453细胞活力及细胞代谢，细胞总数等的影响。流式细胞仪检测不同加药处理组的周期时相变化情况。实验数据经SPSS 10.0统计软件处理，采用单因素方差分析，直线相关分析，以α=0.05为检验水准。[结果]1．胰岛素诱导浓度确定：在胰岛素0.5mu／ml至16.0mu／ml范围内，随着胰岛素浓度增加，对于MDA-MB-453的促进增殖作用逐步增强，之后随着浓度增大，其作用逐渐减弱。其中，8.0mu／ml及16.mu／ml胰岛素促进增殖作用明显高于其他浓度组（p＜0.01）。2．胰岛素促进MDA-MB-453细胞增殖时间确定：结果表明，以胰岛素作用8-18小时之间，促进增殖作用最强，高于单纯细胞对照组及其他时间组（p＜0.01）。3．细胞记数结果：提示在胰岛素浓度7.5mu／ml，作用9-18小时之间，有促进MDA-MB-453增殖作用，细胞记数结果与MTT相符合。4．化疗药物浓度确定：结果表明，化疗药物各浓度组与所测OD值之间存在直线相关关系。根据MTT试验结果，实验时分别选取抑制率为20％或30％的药物浓度(即IC20或IC30)作为加药浓度。ADM IC20=0.36ug／ml，5-Fu IC20=28.0ug／ml，DDP IC20=5.27ug／ml，Vp-16 IC30=70.09 ug／ml，NVB IC30=7.09 ug／ml。5．胰岛素诱导化疗药物增敏实验：各时间组抑制率结果表明在化疗前9-15小时加入胰岛素（浓度7.5mu／ml），可以提高化疗药物对于MDA-MB-453的抑制率。各浓度组抑制率结果提示：胰岛素浓度2.0-16.0mu／ml时，能够增强化疗药物ADM及5-Fu的敏感性，与对照组（单纯化疗药物）相比，差异具有统计学意义（P＜0.01）。6．流式细胞检测结果：胰岛素浓度7.5mu／ml，结果提示：在胰岛素作用3-24小时间，随着作用时间的延长，S期细胞逐渐增多，该作用在处理18小时达到最大。胰岛素能够使S期细胞显著增加，与5-Fu和ADM等能够引起S期阻滞作用的化疗药物有协同作用。[结论]1．胰岛素有促进MDA-MB-453增殖作用，以胰岛素浓度8.0mu／ml及16.mu／ml，作用8-18小时之间该作用最为明显，胰岛素主要作用于细胞周期的S期。2．胰岛素具有化疗增效作用。诱导剂用药的时机选择是实现增效的关键，胰岛素在化疗前9-15小时加入，浓度2.0-16.0mu／ml，能够增加化疗药物对于MDA-MB-453的抑制率。其机制可能为：胰岛素能够使S期细胞增加，与5-Fu和ADM有协同作用。3．初步证实提高代谢水平后可以提高化疗药物的细胞毒作用。

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