复方中药玉屏风多糖的免疫调节作用及其机理的研究

论文摘要

复方中药玉屏风多糖的免疫调节作用及其机理的研究 玉屏风散是中医益气固表的代表名方，在近代临床医疗中被广泛地应用于与免疫功能失调有关的多种疾病的治疗。近代药理学研究发现，玉屏风散对免疫功能具有调节作用。运用药物化学与药理学密切结合的方法，从玉屏风散中筛选分离出活性部位玉屏风多糖，本研究旨在评价玉屏风多糖的免疫调节活性，并探讨其免疫调节作用的机理。 1：目的：运用药物化学与药理学密切结合的方法，将玉屏风散视为一个整体，从汤剂出发，在药理学药效指标的指导下，对其发挥免疫调节作用的活性部位进行筛选。 方法：采用环磷酰胺（Cy）诱导的免疫功能低下小鼠作为整体动物模型，采用脾淋巴细胞的定量溶血试验（QHS，抗体生成试验）和LPS、ConA诱导的淋巴细胞增殖反应作为评价免疫功能的指标。 结果：按极性把玉屏风散分为醇沉和醇溶性两部分，二者均具有改善Cy处理小鼠免疫功能的活性。继续对醇沉部分分级沉淀，获得三个沉淀部分，其中50％醇沉部分免疫活性较强。 结论：提示50％醇沉部分可能包含调节免疫功能的活性成分。 2：目的：玉屏风多糖（YPF-P）是50％醇沉部分纯化获得的多糖成分。本部分实验用非特异性免疫及体液免疫、细胞免疫的相关指标，评价YPF-P对Cy诱导的免疫功能低下小鼠的免疫功能的影响。同时以免疫功能低下的迟发型变态反应（DTH）小鼠脾淋巴细胞为靶细胞，观察了YPF-P对其影响，为阐明YPF-P作用机理积累实验资料。 方法：采用Cy诱导的小鼠免疫低下模型，分别测定腹腔巨噬细胞（PMO）吞噬功能和NK细胞杀伤活性，以及脾淋巴细胞的定量溶血及LPS、ConA诱导的淋巴细胞增殖反应。并采用DNFB诱导的DTH观察细胞免疫功能：采用三色流式细胞技术分析脾细胞淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+细胞亚群；ELISA法检测脾细胞产生细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4水平，同时用RT-PCR技术检测IL-2、IFN-γ、IL-4 mRNA表达，以反映YPF-P对细胞因子分泌的及Th1、Th2细胞亚群功能的影响。

论文目录

• 致谢
• 前言
• 主要英文缩略词（Abbreviation）
• 中文摘要
• Abstract
• 文献综述篇
• 一、玉屏风散的古代文献概况
• 1-1 方剂来源
• 1-2 方剂组成和比例
• 1-3 方剂功用和主治
• 1-4 方剂配伍意义
• 1-5 方剂证治与方论
• 参考文献
• 二、玉屏风散的药理学研究进展
• 2-1 免疫增强作用
• 2-2 抗应激所介导的免疫抑制作用
• 2-3 对T细胞亚群的影响
• 2-4 对细胞间粘附的影响
• 2-5 对胸腺细胞凋亡的影响
• 2-6 组方和配伍剂量的研究
• 2-7 血清药理学研究
• 参考文献
• 三、中药复方药理研究概况
• 3-1 传统的中药复方药理研究
• 3-1.1 处方来源
• 3-1.2 研究目的和内容：
• 3-1.3 研究方法和手段
• 3-1.4 方剂配伍关系的研究
• 3-2 新的研究思路和方法
• 3-2.1 围绕中药化学的药理学
• 3-2.2 对配伍效应认识的深化
• 3-2.3 血清药理学研究
• 3-2.4 中药复方药代动力学研究
• 3-2.5 中药复方新药设想
• 参考文献
• 四、中药活性多糖研究概况
• 4-1 多糖的来源和分布
• 4-2 性质和分类
• 4-3 多糖提取、分离和纯化
• 4-3.1 提取
• 4-3.2 分离和纯化
• 4-3.3 多糖的分级
• 4-3.4 定性和定量检测
• 4-4 多糖的纯度和分子量测定
• 4-4.1 多糖的纯度评价
• 4-4.2 分子量测定
• 4-5 多糖结构分析
• 4-5.1 多糖的初级结构和高级结构
• 4-5.2 多糖的结构分析
• 4-6 多糖的生物活性
• 4-6.1 免疫调节作用
• 4-6.2 多糖的其它生物活性
• 4-6.3 多糖受体
• 4-7 多糖的构效关系
• 4-7.1 多糖活性与主链的组成有关
• 4-7.2 多糖活性与支链的分支度和长度有关
• 4-7.3 多糖的活性与相对分子量有关
• 4-7.4 多糖的活性与构象有关
• 4-7.3 化学修饰会影响多糖的活性
• 4-7.4 其它影响因素
• 4-8 现阶段活性多糖研究存在的问题和展望
• 参考文献
• 实验研究篇
• 五、玉屏风散在药效指标指导下的活性部位的筛选
• 5-1 材料和方法
• 5-1.1 动物和处理
• 5-1.2 主要试剂
• 5-1.3 药物
• 5-1.4 抗体生成试验（定量溶血Quantitative Haemolysis of SRBC（QHS））
• 5-1.5 淋巴细胞转化实验（四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法）
• 5-1.6 统计分析
• 5-2.结果
• 5-2.1 玉屏风散对Cy处理小鼠脾细胞抗体生成反应的影响
• 5-2.2 玉屏风散醇溶部分（Frc1）及醇沉（Frc2）部分对Cy处理小鼠脾细胞抗体生成反应的影响
• 5-2.3 Fr2分级沉淀成分对Cy处理小鼠脾细胞免疫活性的比较
• 5-3 讨论
• 参考文献
• 六、玉屏风多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响
• 6-1.材料与方法
• 6-1.1 药物
• 6-1.2 动物
• 6-1.3 分组和处理
• 6-1.4 巨噬细胞吞噬功能测定：
• 6-1.5 小鼠NK细胞杀伤活性测定（四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法）
• 6-1.6 抗体生成试验（定量溶血,QHS）
• 6-1.7 二硝基氟苯诱导的迟发型超敏反应（DTH）
• 6-1.8 淋巴细胞转化实验（MTT法）
• 6-1.9 流式细胞仪分析脾细胞淋巴细胞亚群
• 6-1.10 脾细胞产生细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4测定（ELISA法）
• 6-1.11 IL-2、IFN-γ、IL-4 mRNA表达的测定（RT-PCR实验）
• 6-1.12 统计分析
• 6-2 结果：
• 6-2.1 YPF-P对Cy诱导的免疫功能低下小鼠PMΦ吞噬功能的影响
• 6-2.2 YPF-P对Cy诱导的免疫功能低下小鼠NK细胞杀伤活性的影响
• 6-2.3 YPF-P对Cy诱导的免疫功能低下小鼠抗体生成反应的影响
• 6-2.5 YPF-P对Cy所致免疫抑制小鼠的淋巴细胞增殖反应的影响
• 6-2.6 YPF-P对Cy诱导的免疫功能低下小鼠脾细胞T淋巴细胞亚群的影响
• 6-2.7 YPF-P对Cy诱导免疫低下小鼠脾淋巴细胞产生细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4水平的影响
• 6-3 讨论
• 参考文献
• 七、玉屏风多糖对佐剂性关节炎模型大鼠巨噬细胞的功能及信号转导的影响
• 7-1 材料与方法
• 7-1.1 动物
• 7-1.2 药品
• 7-1.3 动物分组及给药方案
• 7-1.4 关节炎模型的诱导：
• 7-1.5 关节肿胀度测定
• 7-1.6 屈关节疼痛评分
• 7-1.7 多发性关节炎指数（arthritis index,AI）评分
• 7-1.8 体重及免疫器官重量检测
• 7-1.9 腹腔巨噬细胞（peritoneal macrophages,PMΦ）的分离
• 7-1.10 PMΦ培养
• 7-1.11 巨噬细胞吞噬功能测定：
• 7-1.12 IL-1β、TNF-α和IL-10的含量测定
• 7-1.13 IL-1β、TNF-α和IL-10 mRNA表达RT-PCR检测
• 7-1.14 MΦ胞溶质和核蛋白的抽提
• 7-1.15 腹腔巨噬细胞NF-κB的活性检测
• 7-1.16 Western blot分析
• 7-2 结果
• 7-2.1 对AA大鼠关节肿胀的影响
• 7-2.2 对AA大鼠多发性关节炎指数的影响
• 7-2.3 对关节疼痛评分的影响
• 7-2.4 对AA大鼠体重的影响
• 7-2.5 对AA大鼠免疫器官重量的影响
• 7-2.6 YPF-P对PMΦ释放IL-1β、TNF-α和IL-10水平的影响
• 7.2.7 YPF-P对AA大鼠PMφ表达TNF-αmRNA、IL-1βmRNA及IL-10 mRNA的影响：
• 7.2.8 YPF-P对AA大鼠腹腔巨噬细胞NF-κB活性的影响：
• 7.2.9 YPF-P对AA大鼠PMφ的磷酸化38MAPK、ERK1／2、JNK、I-κB的影响
• 7.3.讨论
• 参考文献
• 小结