论文摘要
贯叶连翘（Hypericum perforatum L.）和小连翘（Hypericumerectum Thunb.）系藤黄科金丝桃属多年生草本植物,具有重要的药用价值。该属植物所含的金丝桃素、黄酮类等物质具有抗抑郁、抗病毒、抗肿瘤和增强免役等作用,从而引起医药界的广泛重视。本文在组织培养、植物化学、分泌结构与金丝桃素类物质积累的相关性方面对小连翘和贯叶连翘进行了系统的研究,获得了一些有价值的成果,填补了贯叶连翘和小连翘在该领域的空白,为贯叶连翘和小连翘的药用价值的开发利用提供了重要的科学依据。主要研究结果如下:1.系统研究了贯叶连翘叶片、结节、茎段为外植体诱导愈伤组织的培养方法,获得了大量的愈伤组织,并分析了其金丝桃素的含量。实验表明:贯叶连翘茎段较叶容易诱导出愈伤组织;贯叶连翘愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2mg/L;而MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.3 mg/L适合愈伤组织的继代培养。HPLC含量测定得出,叶诱导出的愈伤组织中金丝桃素的含量最高,可达0.0015%,而茎诱导出的愈伤组织中金丝桃素的含量为0.0011%。2.系统研究了小连翘种子苗的培养方法和植株再生技术,获得了大量的愈伤组织和试管苗,建立了小连翘稳定的离体培养再生体系。结果表明:小连翘愈伤组织诱导较难,实验采用由种子萌发所获得的无菌苗的叶片、茎和根进行愈伤组织诱导;MS培养基中添加1.0 mg/L的2,4-D和0.2 mg/L的6-BA最适合小连翘愈伤组织的诱导;MS培养基中添加0.2 mg/L的NAA和2.0 mg/L的6-BA最适合小连翘丛生芽的增殖;1/2 MS培养基生根数最多,且对生根小苗增高效果最好。3.对贯叶连翘和小连翘的组织培养物进行了分泌结构和组织化学定位研究,结果表明,金丝桃素存在于分泌细胞团内,金丝桃素的积累与分泌细胞团的形成有关。在未分化的愈伤组织中,未发现分泌细胞团的存在,与HPLC测定不具有金丝桃素结果相一致。4.对小连翘各时期的组织培养物（愈伤组织、丛生芽、生根小苗、生根小苗的叶）进行了金丝桃素类物质的含量对比研究,结果表明,愈伤组织、丛生芽、生根小苗、小苗叶片中金丝桃素的含量由低到高,其中＞5cm的小苗叶片中金丝桃素的含量最高,可高达0.00554%,与野外贯叶连翘植株中金丝桃素含量相接近。表明可以通过小连翘组织培养工业化生产金丝桃素类物质。5.通过半薄连续切片和HPLC测定,研究了贯叶连翘和小连翘成熟叶中分泌细胞团结构与金丝桃素的积累的关系,首次提出了一个分泌细胞团和一个分泌细胞中金丝桃素类物质的含量,实验结果表明,贯叶连翘和小连翘的成熟叶片中,一个分泌细胞中伪金丝桃素的含量最高,分别占金丝桃素类物质总质量的63.12%和55.50%,金丝桃素的含量较少,分别占金丝桃素类物质的29.88%和30.04%,原金丝桃素和原伪金丝桃素仅占了金丝桃素类物质的7.0%和14.46%左右。