硝酸甘油通过一氧化氮途径促进人骨髓间质干细胞增殖及向成骨细胞分化

论文摘要

目的：探讨硝酸甘油（Nitroglycerin，NTG）对人骨髓间质干细胞（Human Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells，HBMSCs）的增殖及向成骨细胞分化的影响及其作用机制。研究方法：建立HBMSCs体外培养模型，在含10％胎牛血清的α-MEM培养基中加入β-甘油磷酸、维生素C和地塞米松，诱导HBMSCs向成骨细胞分化。测定一氧化氮（nitric oxide，NO）代谢产物，考察不同浓度NTG对HBMSCs的NO生成的影响；合用内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）拮抗剂L-NAME以及诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）拮抗剂1400W，探讨NTG作用于HBMSCs的机制是否与eNOS或iNOS有关。给予不同浓度的NTG，考察其对HBMSCs的增殖及向成骨细胞分化的影响：检测5-溴脱氧尿核苷（BrdU）掺入率反映细胞的增殖情况；测定细胞内碱性磷酸酶活性（alkaline phosphataseactivity，ALP activity）与钙沉积量（calcium deposition）的变化，反映不同浓度NTG对HBMSCs向成骨细胞分化的影响，探讨一氧化氮和ALP及钙沉积之间的关系。结果：硝酸甘油（0.1μM-10μM）可增加原代HBMSCs的NO生成量，该效应不能被eNOS抑制剂L-NAME及iNOS拮抗剂1400W所阻滞。NTG在0.1μM-10μM的浓度下可剂量依赖性地促进HBMSCs的增殖，而在0.5μM-10μM的浓度下可剂量依赖性地增加细胞碱性磷酸酶活性及钙沉积量。结论：硝酸甘油可通过NO途径促进HBMSCs的增殖及其向成骨细胞的分化，但其释放NO的效应在HBMSCs上并没有通过eNOS和iNOS起作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 试剂
• 2.2 仪器
• 2.3 细胞培养
• 2.4 实验设计与分组
• 2.5 观察指标
• 2.5.1 细胞增殖指标
• 2.5.2 细胞向成骨细胞分化的指标
• 2.5.3 抑制NOS通路的作用
• 2.5.4 细胞增殖:BrdU Cell proliferation Assay
• 2.5.5 HBMSCs向成骨细胞分化的指标
• 2.6 结果统计
• 第三章 结果
• 3.1 NTG细胞毒性实验
• 3.2 NTG对HBMSCs的NO生成浓度的影响
• 3.3 NTG产生NO的效应与cNOS和iNOS的关系
• 3.4 NTG对HBMSCs增殖的影响
• 3.5 NTG对HBMSCs向成骨分化成熟的影响
• 3.6 机制探讨:NTG对HBMSCs的效应与NO的关系
• 3.7 图表及图例
• 第四章 分析与讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢