蕨麻对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其血清差异蛋白表达的初步研究

论文摘要

目的:研究蕨麻乙醇提取物对大鼠结扎冠状动脉所致急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其对差异蛋白质表达谱的影响。方法:选取雄性SD大鼠随机分为手术对照组,模型组,蕨麻乙醇提取物0.9g?kg-1,1.8g?kg-1,3.6 g?kg-1干预组。手术对照组给予3‰羧甲基纤维素（CMC）,连续灌胃14天,阳性药物组恬尔心组（盐酸地尔硫卓,diltiazem, 30mg?kg-1）于造模前2h口服给药,通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血再灌注模型。测定各处理组动物心功能的变化;取血清检测LDH、CK、SOD、NOS活性及MDA、NO含量;透射电镜检测急性心肌缺血再灌注损伤以后心肌细胞超微结构的变化;采用TUNEL原位凋亡检测方法半定量观察蕨麻乙醇提取物对凋亡细胞阳性率的影响,免疫组化染色检测iNOS、Caspase3、Caspase9蛋白水平;RT-PCR检测心肌组织caspase3 mRNA、caspase9 mRNA水平,探讨蕨麻保护作用的可能机制。用金属离子交换芯片（IMAC3-Cu）和弱阳离子交换芯片（CM10）结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术分析大鼠急性心肌缺血再灌注损伤后不同处理组血清中蛋白质表达谱的改变。结果:1蕨麻乙醇提取物对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用:（1）心功能的变化:与模型组相比,各浓度蕨麻乙醇提物给药组均明显改善心功能指标（±dp/dt max） （P<0.01）;高、中剂量组左室收缩压（Lvsp）也较模型组升高（P<0.05）;（2）HE染色:模型组、蕨麻各浓度组及阳性药物组缺血范围为左室前侧壁。其中模型组组织病理学改变显著,心肌间质出现炎细胞浸润,心肌纤维嗜酸性变,肌节断裂、消失,坏死明显;蕨麻高、中剂量组心肌损伤程度较模型组明显减轻,低剂量组效果稍差,但较模型组仍有改善。（3）心肌超微结构的变化:电镜结果显示蕨麻各浓度给药组能够减轻心肌细胞缺血再灌注损伤导致的线粒体肿胀、空泡化等超微结构的损伤改变,维持相对整齐的心肌纤维排列。（4）血清LDH、CK检测:各浓度蕨麻给药组（与模型组相比）均可显著降低缺血再灌注损伤后大鼠血清LDH活性（P<0.01）、CK活性（P<0.01）;（5）TUNEL染色:各浓度蕨麻给药组（与模型组相比）均可显著降低心肌细胞凋亡指数（P<0.01）。2蕨麻乙醇提取物对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用的机制研究:（1）血清MDA、SOD、NO检测:与模型组相比,各浓度蕨麻可显著提高大鼠血清中SOD活力（P<0.01）,减少MDA的产生（P<0.01）,降低NO含量（P<0.01,P<0.05）,且呈现一定的浓度依赖性;（2）免疫组化染色:与模型组相比,各剂量蕨麻可显著降低缺血再灌注损伤后大鼠心肌组织iNOS （P<0.01）、Caspase3（P<0.01）、Caspase9（P<0.01）蛋白表达。（3）RT-PCR:给与高、中剂量蕨麻乙醇提取物可显著降低缺氧损伤心肌caspase-9 mRAN水平（P<0.05）,低剂量组与模型组相比未见明显差异。模型组caspase-3 mRAN表达量较手术对照组显著升高,高、中、低剂量蕨麻乙醇提取物组可显著降低心肌组织caspase-3 mRAN水平（其中高、中剂量组P<0.01,低剂量组P<0.05）。3金属离子交换芯片（IMAC3-Cu）结果显示与模型组比,蕨麻给药组有1个蛋白表达上调,5个蛋白表达下调。弱阳离子交换芯片（CM10）结果显示9个蛋白表达上调,1个蛋白表达下调。结论:1蕨麻乙醇提取物能够显著改善急性心肌缺血再灌注所致的心肌组织形态的病理改变,保护心肌组织的超微结构,改善心脏功能;显著抑制心肌缺血再灌注损伤所诱导的细胞凋亡。对急性心肌缺血再灌注具有明显的保护作用。2蕨麻对心肌缺血再灌注损伤的保护作用可能与其清除氧自由基、降低NO含量、抑制Caspase家族凋亡相关蛋白表达等有关。3心肌损伤可引起血清蛋白质表达谱变化。不同药物处理组蛋白质表达谱存在差异,提示血清中出现的差异蛋白质中部分可能为心肌损伤诱导的基因表达产物及药物作用靶点。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 蕨麻对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其血清差异蛋白表达的初步研究
• 第一部分 蕨麻对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 利用SELDI-TOF技术检测蕨麻对大鼠心肌缺血再灌注损伤后血清差异蛋白表达谱的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 蛋白质组学技术及其在药学研究中的应用
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历