法尼酯衍生物X受体拮抗剂的发现及其功能研究

论文摘要

法尼酯衍生物X受体（FXR）是一个配体依赖性的转录因子,是核受体超家族的一员,研究表明FXR参与了调控胆汁酸、胆固醇、脂代谢与糖代谢的平衡,与代谢综合症,肝胆疾病,Ⅱ型糖尿病等疾病之间存在了密切的关系。本论文运用了当代重要的生物学技术如表面等离子共振SPR技术,酵母双杂交技术,哺乳动物单杂交技术、细胞转录激活实验技术等,开展了以FXR为药物筛选靶标的先导化合物的发现研究。通过对现有实验室化合物库进行的高通量筛选工作,我们发现了1个结构全新的小分子化合物DCW852为FXR的拮抗剂,这为基于FXR为靶点的抗代谢性疾病先导化合物的发现提供了重要的结构信息。随后我们对DCW852进行了相关的生理功能研究,利用细胞转录、qRT-PCR、Western Blot等实验首次发现DCW852作为FXR的拮抗剂,可以分别在转录水平、mRNA水平、蛋白质水平有效缓解内质网应激的作用,而内质网应激又与Ⅱ型糖尿病及肝胆疾病有着密切的关系,因此这为研究FXR与相关疾病之间的关系又提供了一条宝贵的思路。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 法尼酯衍生物X受体（FXR）的研究概述
• 1.1 引言
• 1.2 FXR的发现
• 1.3 FXR的结构、分型与分布
• 1.4 FXR的功能研究
• 1.4.1 调节胆汁酸代谢
• 1.4.2 调节脂质代谢
• 1.4.3 调节糖代谢
• 1.5 FXR与疾病
• 1.5.1 FXR与肝胆疾病
• 1.5.2 FXR与肠道疾病
• 1.5.3 FXR与肾脏疾病
• 1.5.4 FXR与动脉粥样硬化
• 1.5.5 FXR与肿瘤
• 1.6 FXR配体的研究进展
• 1.7 FXR配体的筛选方法
• 1.7.1 计算机辅助药物虚拟筛选
• 1.7.2 同位素竞争试验
• 1.7.3 生物传感器检测
• 1.7.4 共激活物/共抑制物结合试验
• 1.7.5 哺乳动物单杂交技术
• 1.7.6 哺乳动物反式激活实验
• 1.8 本课题研究的目的、内容
• 1.8.1 研究目的
• 1.8.2 研究内容
• 第2章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 菌株
• 2.1.2 细胞系
• 2.1.3 质粒
• 2.1.4 试剂
• 2.2 仪器与设备
• 2.3 常用方法
• 2.3.1 细胞的培养
• 2.3.2 琼脂糖凝胶电泳
• 2.3.3 非连续SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳
• 第3章 FXR拮抗剂筛选平台的建立以及FXR拮抗剂的发现
• 3.1 前言
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 FXRα-LBD和SRC1-NRID蛋白的表达纯化
• 3.2.2 FXRα-LBD和SRC1-NRID蛋白芯片的制备
• 3.2.3 DCW852对FXRα-LBD的亲和活性分析
• 3.2.4 DCW852对FXR-LBD/SRC1-NRID相互作用分析
• 3.2.5 酵母双杂交系统的构建
• 3.2.6 运用酵母双杂交系统进行FXR配体的筛选
• 3.2.7 哺乳动物单杂交实验
• 3.2.8 哺乳动物反式激活实验
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 FXRα-LBD和SRC1-NRID蛋白的表达纯化
• 3.3.2 DCW852与FXR具有很高的亲和结合活性
• 3.3.3 DCW852能够拮抗CDCA诱导的FXR-LBD/SRC1-NRID相互作用
• 3.3.4 DCW852能够在酵母细胞水平上抑制CDCA诱导增强的FXR/SRC1相互作用
• 3.3.5 哺乳动物单杂交系统验证DCW852是FXR的拮抗剂
• 3.3.6 哺乳动物反式激活实验验证DCW852能够拮抗CDCA诱导的FXRE转录活性.
• 3.4 讨论和小结
• 第4章 FXR拮抗剂的相关功能研究
• 4.1 前言
• 4.1.1 FXR与胆汁酸代谢的关系
• 4.1.2 FXR与内质网应激的关系
• 4.2 DCW852对胆汁酸代谢的功能研究
• 4.2.1 实验方法
• 4.2.2 实验结果与讨论
• 4.3 DCW852对内质网应激的功能研究
• 4.3.1 实验方法
• 4.3.2 实验结果与讨论
• 4.4 讨论与小结
• 第5章 结论
• 参考文献
• 论文及专利发表情况
• 致谢