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钙蛋白酶在脊髓损伤中的作用及相关机制的研究

2020-11-23阅读(686)

钙蛋白酶在脊髓损伤中的作用及相关机制的研究

论文摘要

目的探讨钙蛋白酶（Calpain）在脊髓继发性损伤过程中的机制,为寻求治疗脊髓损伤开辟新途径。方法制作大鼠脊髓损伤动物模型,获取病理标本。应用Northern blot及Western blot检测Calpain mRNA表达并测定其活性;进行神经组织凋亡检测（TUNEL法）,免疫组化及RT-PCR半定量技术检测大鼠脊髓损伤后不同时段Calpain表达的变化规律并与神经凋亡进行相关性分析,另外应用Calpain抑制剂E-64-d对损伤大鼠进行实验性治疗,观察其对实验大鼠的神经保护作用;同时亦探讨Calpain在脊髓损伤后细胞骨架蛋白MAP2降解及反应性胶质增生过程中的作用机制。结果⑴脊髓损伤后出现Calpain mRNA的表达且Calpain活性增加。⑵Calpain表达在对照组较低。伤后1天在灰质和白质可见表达的阳性细胞;3天表达染色指数最高;7天后染色指数逐渐减少。伤后1天脊髓组织Calpain mRNA开始升高,2天达到高峰,随后开始下降。采用直线相关分析,Calpain表达与神经细胞凋亡呈正相关。E-64-d治疗组Calpain表达的染色指数及Calpain mRNA表达值与损伤组比较,在相应的各时间点均减少。⑶伤后1天,即出现MAP2表达减弱。染色指数在伤后3天最低,伤后14天染色指数恢复。MAP2的表达与Calpain的表达呈现负相关。⑷脊髓损伤后,大鼠脊髓灰质和白质内可见明显的反应性星形胶质细胞形成。应用Calpain抑制剂Ⅰ治疗后,大鼠脊髓中反应性星型胶质细胞数量及染色面积均减小,Calpain抑制剂Ⅱ则未能明显抑制脊髓损伤后反应性神经胶质增生。结论1.大鼠脊髓损伤后Calpain mRNA增加,在损伤区神经组织内Calpain表达增强。2.大鼠脊髓损伤后Calpain过度激活可诱导神经细胞出现坏死或凋亡,Calpain抑制剂E-64-d具有一定的神经保护作用。3. CalpainⅠ表达增加可刺激大鼠脊髓损伤后反应性胶质增生。

论文目录

  • 前言
  • 第一章 综述
  • 第一节 脊髓损伤研究的现状和进展
  • 第二节 钙蛋白酶在脊髓损伤中的意义及其抑制剂的神经保护作用
  • 第二章 大鼠继发性脊髓损伤中钙蛋白酶的表达
  • 第一节 Calpain 序列分析（预实验）
  • 第二节 从mRNA和蛋白水平证实损伤脊髓细胞表达Calpain
  • 材料与方法
  • 结果
  • 小结
  • 第三章 大鼠脊髓损伤后钙蛋白酶及其抑制剂对神经细胞凋亡的影响
  • 一、材料与方法
  • 二、结果
  • 小结
  • 第四章 大鼠脊髓损伤后钙蛋白酶对神经元细胞骨架蛋白 MAP2 的降解作用
  • 一、材料与方法
  • 二、结果
  • 小结
  • 第五章大鼠脊髓损伤后钙蛋白酶的表达及神经胶质纤维增生
  • 一、材料与实验方法
  • 二、结果
  • 小结
  • 第六章 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 附图
  • 攻读博士期间发表的论文
  • 论文摘要
  • ABSTRACT
  • 致谢

    • 相关论文文献

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