一、基因芯片在妇科肿瘤中的应用（论文文献综述）
江海瀚[1]（2021）在《基于生物信息学对子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌发病相关基因的初步研究》文中研究指明目的:子宫内膜异位症,简称内异症（Endometriosis,EMT）是指子宫内膜组织（腺体和间质）出现在子宫体以外的部位,好发于育龄妇女,最常见于卵巢和宫骶韧带。内异症在形态学上呈良性表现,但有类似恶性肿瘤的临床行为学特点,并且具有一定的恶变趋势,综合研究表明其恶变率约0.7～1%。本研究旨在初步研究子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌发病的相关基因,为寻找有意义的标志物和靶向治疗目的基因提供一定的数据。方法:从GEO数据库搜索并下载GSE7305、GSE6008数据集中的原始数据,利用R语言对数据进行归一化等处理后分别获取各数据集病变组织与正常组织的差异基因,将两组差异基因取交集,并将交集部分基因进行富集分析,筛选出可能具有意义的通路和基因进行讨论分析。选择更严格的筛选条件进行差异基因筛选并进行富集分析,选取表达差异较大的2个基因以及此2个基因参与的通路进行分析。对子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌、非子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌、卵巢子宫内膜异位症及正常卵巢组织的石蜡标本应用免疫方法检测选取基因的表达情况,并进行统计学分析。结果:以P值<0.05,log＿2|Fold Change|>1为条件筛选出差异基因,两数据集存在交集基因610个。进行富集分析后可见,这些差异基因可能影响着p53等通路,也可能影响着卵巢癌细胞中的各项生物过程。选择更严格的筛选条件后,筛选出交集差异基因143个。再次进行富集分析,选取RGS2、MYLK基因及c GMP-PKG通路进行讨论分析。以对石蜡标本进行免疫组化的方法进行验证RGS2及MYLK在子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌中的表达情况,结果表明RGS2在子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌组与非子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌组间表达差异有统计学意义（P=0.003）,而MYLK在子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌组及非子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌组间表达差异无统计学意义。结论:1.基于信息生物学分析RGS2、MYLK、CEACAM1、VEGFA、EGFR等差异基因的表达改变可能参与子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌的恶变过程,在表达呈下调的差异基因中RGS2及MYLK的差异尤为显着。2.RGS2在子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌组织中呈现表达下调。3.MYLK在子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌组中虽有表达下调的趋势,但与非子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌组之间无明显差异。
孙欣慰[2]（2020）在《KIF15对卵巢癌增殖和凋亡的影响及相关调控网络的生物信息学分析》文中进行了进一步梳理目的卵巢癌（Ovarian Cancer,Ov Ca）是在妇科恶性肿瘤中致死率排名第一位的肿瘤。卵巢癌起病隐匿,难于早期诊断,大部分患者在诊断时已进展至晚期。由于缺乏可靠的指标,卵巢癌的早期诊断和预后都是亟待解决的临床难题。此外,虽然卵巢癌的靶向治疗不断发展,但由于低应答率和耐药性的问题,仍有相当一部分患者难以从现有的靶向治疗中获益。基于此,寻找在卵巢癌早期就能够帮助诊断和预测患者预后情况,以及有望作为卵巢癌治疗靶点的新的生物标记物,成为卵巢癌诊断和治疗领域迫切需要解决的问题。生物信息学是生命科学与计算机科学相结合形成的一门新兴的交叉学科。近年来,随着GEO、TCGA等多个全球性肿瘤数据库不断建立和完善,肿瘤数据库的信息提取和深入挖掘已经成为了肿瘤研究的热点和重点。利用生物信息学方法挖掘肿瘤数据库的已有数据,有针对性地获取肿瘤相关分子,是获得有效生物标记物、筛选信号通路分子进而揭示肿瘤发生、发展内在机制的高效方法,运用该方法能够大大提高筛选诊断、预后和治疗靶标的效率和可靠性。因此,在本课题中,我们拟通过对GEO数据库、TCGA数据库等在线数据库中的卵巢癌相关数据进行数据挖掘,分析获得卵巢癌m RNA表达谱中的差异表达基因,结合多种生物信息学方法从这些差异表达基因中筛选获得能够显着影响卵巢癌患者生存期、帮助预测患者预后情况的生物标记物,再通过对目的基因功能和调控网络的研究,进一步了解目的基因在卵巢癌中发挥的作用及其调控机制,为该分子作为辅助诊断、预后预测因子或进一步作为治疗靶标应用于临床,提供理论依据。材料与方法1.GEO卵巢癌基因芯片数据挖掘、差异表达基因分析和目的基因筛选1)GEO卵巢癌数据集的检索、筛选和下载;使用R软件从质量灰度、权重、残差、残差符号、RLE、NUSE和RNA降解等多个方面对拟进行分析的基因芯片数据进行质量评估;2)对选取的4个GEO卵巢癌数据集进行数据预处理,剔除不合格样本后,使用RMA算法分别进行背景校正、标准化和log2处理,再将对照组和肿瘤组数据进行合并、汇总,通过Affymetrix平台的芯片注释文件,将探针ID转换为基因名称;分别对每个卵巢癌数据集进行差异表达分析;3)使用DAVID在线工具对差异表达基因进行GO和KEGG富集分析;根据GO分析结果对增殖相关的差异表达基因进行筛选;4)使用Kaplan-Meier Plotter工具进行备选基因的OS和PFS生存分析,并绘制生存曲线;5)使用Oncomine公共数据平台进行备选基因表达分析和验证;6)使用GEPIA数据库对候选基因在不同分期的卵巢癌中的表达进行分析。2.KIF15在卵巢癌的表达验证和体内外功能研究1)利用GTEx来源的人体正常组织RNA-seq数据和TCGA来源的卵巢癌样本RNA-seq数据对KIF15在正常人体组织器官的表达和在卵巢癌中的差异表达进行分析;2)利用文献中报道的干细胞指数m RNAsi数据,采用WGCNA法揭示KIF15与卵巢癌干细胞增殖的相关性;3)免疫组化法检测卵巢癌组织芯片中KIF15蛋白的表达,并对免疫组化染色结果的评估;4)使用CCLE肿瘤细胞数据库获得45种卵巢癌细胞株的KIF15 m RNA数据,了解KIF15 m RNA在卵巢癌细胞株中的表达谱;5)Real time-PCR检测包括卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、HO8910和Ovcar-3,宫颈癌细胞株Hela、Siha和C33a,肺腺癌细胞株A549、胰腺癌细胞株PANC-1和神经胶质母细胞瘤细胞株U87等多种肿瘤细胞株中KIF15 m RNA的表达;6)对卵巢癌细胞株进行sh RNA慢病毒转染,Real-time PCR和Western Blot法检测慢病毒转染效率;7)Celigo法细胞计数和CCK8法检测KIF15敲减后细胞增殖情况;8)FACS法和Caspase3-7法检测KIF15敲减后细胞凋亡情况;9)裸鼠成瘤实验及动物活体成像,观察成瘤情况,并对瘤体进行抗KIF15免疫组化染色。3.敲降KIF15卵巢癌细胞样本的基因表达谱检测与生物信息学分析1)对SKOV3细胞进行Sh RNA慢病毒感染,RT-PCR法验证敲降KIF15的效率;2)从A260/A280比值、RIN值和28s/18s比值三个指标,对总RNA的质量进行评估;3)使用3′IVT反应法对基因芯片进行检测;4)从质量灰度、权重、残差、残差符号、RLE、NUSE等多个方面对基因芯片质量进行分析;5)进行差异表达基因分析;6)运用基因富集分析工具Fun Rich、Clue GO和GSEA等不同方法对差异表达基因进行功能和信号通路的富集分析,筛选出凋亡相关的通路;4.敲降KIF15卵巢癌细胞样本的磷酸化蛋白芯片检测与生物信息学分析1)使用磷酸化蛋白芯片对敲降KIF15的SKOV3细胞样本进行检测,并对原始图片进行扫描和分析;2)依据m RNA基因表达谱的分析结果从磷酸化蛋白芯片的数据中筛选出对应的凋亡相关通路及通路上的分子,构建磷酸化蛋白核心网络;3)分别从m RNA水平和蛋白水平对三条信号通路上的分子作重叠性分析,确定三条凋亡相关通路的交叉分子,验证敲降KIF15是通过调控三条凋亡相关通路交联形成的网络发挥促凋亡作用的。结果1.GEO卵巢癌基因芯片数据挖掘、差异表达基因分析和目的基因筛选结果1)经过多个指标的评估,认为本研究选用的芯片质量较为可靠,可以进行后续数据分析;2)以|Log FC|≥1.5和p<0.05为差异基因的筛选标准;GSE40595数据集包含上调基因2544个,下调基因52个;GSE18520数据集包含上调基因582个,下调基因580个;GSE38666数据集包含上调基因1487个,下调基因205个;GSE36668数据集包含上调基因2216个,下调基因108个;4个数据集具有共同上调差异表达基因183个,下调差异表达基因7个;3)GO分析结果中,我们选取p值最小的前10位GO分类,其中与增殖相关的有5个,包括“cell division”,“mitotic nuclear division”,“cell proliferation”,“mitotic sister chromatid segregation”和“chromosome segregation”。在这5个GO分类的共42个基因中,存在17个富集于2个或2个以上细胞增殖相关GO分类的基因（SAC3D1,NUF2,FAM83D,TPX2,KIF11,ZWINT,CDCA3,NDC80,PTTG1,BUB1B,KIF15,KIF18B,SPAG5,CENPF,CDC20,CDK1 and KIF2C）;4)在Kaplan-Meier Plotter中进行生存分析,上述17个基因中,BUB1B,CDK1,CENPF,FAM83D、TPX2和KIF15等6个基因均与卵巢癌患者的总生存率（OS,p<0.01）和无进展生存率（PFS,p<0.05）呈负相关;5)在Oncomine数据库中,上述6个基因除FAM83D外均有权威数据集TCGA支持其m RNA在卵巢癌组织中存在差异表达,因此我们对其余5个基因进行进一步分析;6)BUB1B,CDK1,CENPF,TPX2和KIF15 m RNA的表达均与stage I-II期卵巢癌患者的PFS和OS呈明显负相关,且这些基因高表达于I-II期卵巢癌患者时较卵巢癌患者总体具有更大的风险比HR值;7)BUB1B、CENPF和KIF15在不同分期的卵巢癌组织中表达具有显着性差异,且早期（stage II）表达高于中晚期（stage III和IV）,这种差异在KIF15（F=5.03,p值=0.00692）高于BUB1B（F=4.7,p值=0.00954）和CENPF（F=3.8,p值=0.0232）。2.KIF15在卵巢癌的表达验证和体内外功能研究结果1)KIF15 m RNA在人体正常组织器官中,除骨髓外,均为低表达;在卵巢癌组织中存在过表达;2)WGCNA分析揭示了KIF15与卵巢癌细胞的干性调控相关,并参与卵巢癌干细胞的增殖调控;3)免疫组化染色提示KIF15蛋白仅存在于胞浆中。在90例不同病理类型的卵巢癌组织中,有68例（75.6%）存在KIF15蛋白的高表达,22例（24.4%）低表达,而在10例癌旁组织中,有2例（20%）高表达,其余8例（80%）均为低表达,KIF15蛋白在卵巢癌和癌旁组织中表达水平的差异具有显着性（p<0.05）;该组织芯片中除去10例癌旁组织和10例淋巴结转移腺癌,其余80例卵巢癌组织中,包括64例临床分期为I-II期的样本,其中KIF15高表达样本有49例（76.6%）;其余16例III-IV期样本中,KIF15高表达的有11例（68.8%）。在不同的病理类型中,5例透明细胞癌中有3例KIF15高表达（60%）),11例粘液性腺癌中有8例高表达（72.7%）,1例子宫内膜样腺癌为高表达,其余63例浆液性腺癌中,有49例（77.8%）高表达KIF15在不同的病理类型中,5例透明细胞癌中有3例KIF15高表达（60%）),11例粘液性腺癌中有8例高表达（72.7%）,1例子宫内膜样腺癌为高表达,其余63例浆液性腺癌中,有49例（77.8%）高表达KIF15。上述结果提示,KIF15蛋白在早期卵巢癌患者的组织中就有广泛的高表达,在不同病理类型的卵巢癌中均有广泛的高表达,没有明显的病理类型特异性。在包括妇科常见恶性肿瘤卵巢癌、宫颈癌和肺腺癌、胰腺癌、神经胶质母细胞瘤在内的10种肿瘤细胞株中,SKOV3的KIF15 m RNA表达最高,HO8910表达最低,其余8种细胞株的KIF15 m RNA表达量都介于这两种细胞株之间,本课题将SKOV3和HO8910两种细胞株作为我们后续功能实验中的细胞株;4)Sh RNA慢病毒对SKOV3的敲减效率为83.1%,HO8910的敲减效率为61.0%,可以满足后续实验的需要;5)Celigo细胞计数:将Day5这个观察时间节点的SKOV3细胞的细胞数与Day1的细胞数进行比较,Sh Control的细胞增殖倍数是7.63±0.11倍,Sh KIF15组的细胞增殖倍数是1.24±0.03倍,组间比较具有显着性差异(t检验,p值=6.82701×10-8);HO8910细胞Sh Control的增殖倍数是5.65±0.19倍,Sh KIF15组的增殖倍数是1.72±0.07倍,组间比较也具有显着性差异(t检验,p值=7.10173×10-11),提示敲降KIF15能够显着抑制细胞增殖;6)CCK8法检测:SKOV3 Sh Control组Day5的OD值是Day1 OD值的4.095±0.0294倍,Sh KIF15组Day5的OD值是Day1 OD值的2.483±0.038倍,HO8910Sh Control组Day5的OD值是Day1 OD值5.11±0.0291倍,Sh KIF15组Day5的OD值是Day1 OD值的2.416±0.0268倍,同种细胞组间进行比较,均具有显着性差异(t检验,SKOV3 p值=1.11593×10-12,HO8910 p值=3.85188×10-15),进一步验证了敲降KIF15能够显着抑制卵巢癌细胞增殖;7)FASC法检测细胞凋亡:在慢病毒感染后的72h对KIF15敲减后SKOV3和HO8910细胞的凋亡情况进行检测,SKOV3细胞Sh KIF15组凋亡细胞的比例是6.4±0.255%,Sh Control组的凋亡细胞比例是2.98±0.192%,HO8910 Sh KIF15组的凋亡细胞比例是10.58±0.577%,Sh Control组的凋亡细胞比例是4.03±0.142%。两种细胞Sh KIF15组的凋亡细胞比例均显着高于sh Control组(t检验,SKOV3 p值=5×10-5,HO8910 p值=4×10-5),提示敲降KIF15能够显着促进卵巢癌细胞凋亡;8)Caspase3-7法检测细胞凋亡:该方法所检测的发光信号的强弱程度与Caspase-3/7的活性成正比。在SKOV3和HO8910细胞中,sh KIF15组的发光信号强度（即Caspase活性的指标）均明显高于Sh Control组（t检验,SKOV3 p值=0.000847283,HO8910 p值=0.000283606）,提示sh KIF15组细胞凋亡率显着高于Sh Control组,进一步验证了KIF15敲减能够显着促进卵巢癌细胞凋亡;9)动物活体成像:注射Sh Control慢病毒感染的SKOV3的NC组10只裸鼠注射部位均显示不同强弱程度的荧光表达,提示皮下均有瘤体形成;而注射Sh KIF15慢病毒感染的SKOV3的KD组10只裸鼠,仅有1只裸鼠注射部位可见荧光信号,其余裸鼠均未见有明显的荧光信号,提示仅有1只裸鼠皮下有瘤体形成;10)裸鼠皮下成瘤:NC组的瘤体重量是1.482±0.273g,KD组只获得一枚皮下成瘤样本,肿瘤是0.061g,NC组的瘤体重量与KD组比具有显着性差异（t检验,p值=8.442×10-11）,提示KIF15敲减后的SKOV3细胞在裸鼠体内的成瘤能力明显下降;11)NC组瘤体抗KIF15免疫组化染色呈棕褐色,KD组呈淡黄色,提示在上述荷瘤实验所获得的瘤体中,KD组瘤体中的KIF15蛋白表达明显低于NC组。3.敲降KIF15的SKOV3细胞样本的基因表达谱检测与生物信息学分析1)总RNA质量分析:6个待测样本RNA纯度较高,完整性较好,质量合格,适合进行基因芯片分析;2)基因芯片质量分析:本研究中所用芯片和样本均质量可靠,这也是后续实验中数据分析可靠性的保证;3)差异表达基因分析结果:KD组与NC组进行比较,以|FC|≥1.5,p value值<0.05为标准对差异表达基因进行分析,筛选出表达上调基因134个,下调基因309个;4)Funrich软件功能和通路富集分析:在上调基因中,可以观察到生物过程主要富集于核酸代谢、细胞通讯和信号转导等过程,信号通路主要富集于Er Bb、TRAIL、PI3K/Akt等肿瘤相关通路和细胞粘附（Cell adhesion）相关通路中;在下调基因中,富集基因比例排在前三位的生物过程分别是蛋白代谢、抗凋亡（Anti-apoptosis）和蛋白定位,且信号通路富集（p<0.05）的前11条通路中有4条都与凋亡（Apoptosis）相关,依次是凋亡因子介导反应（Apoptotic factor-mediated reponse）,SMAC介导的IAP caspase复合物的解离（SMAC mediated dissociation of IAP:caspase complex）,SMAC结合IAPs（SMAC binds to IAPs）和SMAC介导凋亡反应（SMAC mediated apoptotic response）;5)Clue GO法通路富集分析:Apoptosis,TNF signaling pathway和NF kappa B signaling pathway三条信号通路是所有通路富集分析结果中囊括基因最多、最主要的通路,且均与凋亡相关;6)GSEA法富集分析:Apoptosis和TNFαsignaling via NFkb是上述差异基因的凋亡相关分子特征。4.敲降KIF15的SKOV3细胞样本的磷酸化蛋白芯片检测与生物信息学分析1)在蛋白水平上,敲降KIF15引起了Apoptosis,TNF signaling pathway和NF kappa B signaling pathway三条凋亡相关信号通路的激活;2)Apoptosis,TNF signaling pathway和NF kappa B signaling pathway三条凋亡相关信号通路在m RNA水平和蛋白水平均存在相互交联,构成凋亡相关调控网络;3)三条凋亡相关通路在m RNA水平上的交叉分子为MAP3K14和TNF,在蛋白水平上的交叉分子为NFk B-p105/p50,Phospho-Ser337、IKK-beta,Phospho-Tyr199、NFk B-p65,Phospho-Ser529和IKK-gamma,Phospho-Ser31,上述蛋白分子均存在显着的磷酸化,提示功能的激活。结论KIF15是卵巢癌中具有早期辅助诊断和预后预测价值的增殖相关基因。敲降在卵巢癌KIF15能够在体外显着抑制卵巢癌细胞的增殖,促进其凋亡,在体内亦能够明显抑制卵巢癌细胞成瘤。这种作用是敲降KIF15抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的共同结果。敲降KIF15通过Apoptosis、TNF signaling pathway和NF kappa B signaling pathway三条凋亡信号通路相互交联形成的调控网络的激活促进卵巢癌细胞的凋亡。因而,KIF15有望作为有效的治疗靶点应用于临床。
陈世超[3]（2020）在《miR-152、miR-182在子宫内膜组织中的表达及临床意义》文中研究表明目的:检测miR-152及miR-182在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生组织和子宫内膜癌组织中的差异表达,分析与子宫内膜癌临床病理特征的关系,初步评估其对子宫内膜癌的诊断价值。方法:选取2017年9月至2019年12月于河北大学附属医院行手术治疗的110例患者,其中子宫内膜癌患者60例（子宫内膜腺癌47例,特殊类型子宫内膜癌13例）,子宫内膜不典型增生患者20例,子宫肌瘤以及子宫脱垂患者共30例。分别于术中切取新鲜的子宫内膜病变组织和正常子宫内膜组织,应用实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR,RT-q PCR）分别检测miR-152及miR-182在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生组织及子宫内膜癌组织中的表达,分析二者的相对表达量在正常组织和癌组织中的差异及与子宫内膜癌临床病理特征的关系,并进一步分析两个基因在正常子宫内膜组到子宫内膜不典型增生组再到子宫内膜腺癌组进展中的变化。分别绘制受试者工作特征曲线（Receiver operating characteristic curve,ROC）,计算灵敏度、特异度及曲线下面积（Area under the ROC curve,AUC）,评估二者对子宫内膜癌的诊断效能。结果:实时荧光定量PCR的结果显示:1、miR-152在正常子宫内膜和子宫内膜癌标本中的相对表达量分别为0.999±0.416和0.583±0.226,在癌组织中的相对表达量较正常组织中显着降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。miR-152在Ⅲ-Ⅳ期、肌层浸润深度≥1/2、脉管间隙受侵阳性、淋巴结转移阳性的患者中显示出更低的表达水平,在腺癌患者中的表达也低于特殊类型子宫内膜癌患者,差异均具有统计学意义（P<0.05）。但其在不同病理分级、年龄及是否绝经的患者中的相对表达量差异均不具有统计学意义（P>0.05）。2、miR-152在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生、子宫内膜腺癌患者中的相对表达量分别为0.999±0.416、0.714±0.239和0.627±0.214,呈逐渐下降的趋势,差异具有统计学意义（P<0.05）。且正常组的相对表达量均低于子宫内膜不典型增生组和子宫内膜腺癌组,差异具有统计学意义（P<0.05）,但子宫内膜不典型增生组和子宫内膜腺癌组的相对表达量差异无统计学意义（P>0.05）。3、miR-182在正常子宫内膜和子宫内膜癌标本中的相对表达量分别为1.356±0.709和3.301±1.445,在癌组织中的相对表达量较正常组织显着升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。miR-182的表达水平在特殊类型子宫内膜癌患者中高于腺癌患者,在Ⅲ-Ⅳ期患者中高于Ⅰ-Ⅱ期患者,差异均具有统计学意义（P<0.05）。其相对表达量差异在不同年龄、病理分级、肌层浸润深度患者中无统计学意义,在是否合并脉管间隙受侵、淋巴结转移及是否绝经的患者中也不存在统计学意义（P>0.05）。4、miR-182在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生、子宫内膜腺癌患者中的相对表达量分别为1.356±0.709、1.827±0.422和3.036±1.309,呈逐渐升高的趋势,差异具有统计学意义（P<0.05）。三组之间两两比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）。ROC曲线结果表明:1、以正常子宫内膜组为参照,miR-152诊断子宫内膜癌的ROC曲线下面积为0.810,敏感度为86.7%,特异度73.3%。2、以正常子宫内膜组为参照,miR-182诊断子宫内膜癌的ROC曲线下面积为0.932,敏感度为93.3%,特异度为86.7%。结论:1、miR-152与miR-182在子宫内膜癌组织中表达失常,可能分别为子宫内膜癌的抑癌基因和促癌基因,二者与临床病理特征的关系提示其对诊断评估子宫内膜癌的恶性程度和临床进展有一定的价值。2、miR-152与miR-182对子宫内膜癌均具有较好的诊断效能,有望成为早期诊断子宫内膜癌的分子生物学标记物。
闫文星[4]（2020）在《探讨影响宫颈癌患者的预后因素及其机制》文中研究表明目的:1.探讨影响宫颈癌患者预后的独立危险因素,评估淋巴脉管间隙浸润对IB-IIA期宫颈癌的预后意义和新辅助化疗在狭义的局部晚期宫颈癌中的应用价值。2.寻找可能影响宫颈癌预后的差异基因及相关信号通路,为耐药的宫颈癌患者提供新的治疗策略。方法:1.采用回顾性队列研究方法,对吉林大学第二医院2014年02月至2016年12月收治的IB-IIA期宫颈癌和狭义的局部晚期宫颈癌（IB2和IIA2期）患者进行分析。IB-IIA期宫颈癌患者均行C型根治术和盆腔淋巴结切除术,苏木精-伊红（H&E）染色鉴定淋巴脉管间隙浸润,评价其对IB-IIA期宫颈癌患者预后的影响。针对狭义的局部晚期宫颈癌患者,根据患者是否接受新辅助化疗（紫杉醇联合铂类）进行分组,比较两组患者的总生存率（OS）和无进展生存率（PFS）。Kaplan-Meier曲线用于计算患者的生存率,采用对数秩检验比较生存率,Cox回归分析评估影响预后的危险因素。2.利用基因芯片筛选出与肿瘤放化疗抵抗性有关的信号通路,对差异变化的基因进行聚类分析。将筛选的目的基因用免疫组化的方法在相同分期但预后差异的患者中进行验证。将筛选的目的基因利用慢病毒进行敲除,CCK-8法和流式细胞仪检测慢病毒转染Hela细胞及联合顺铂对增殖和凋亡能力的影响,Western blot检测慢病毒转染Hela细胞后P21、Bcl-2、Bax蛋白的表达变化。结果:1.淋巴脉管间隙浸润的发生率与间质浸润深度（P=0.009）和淋巴结转移呈正相关（P<0.001）。淋巴脉管间隙浸润是影响IB-IIA期宫颈癌患者OS（P=0.009）和PFS（P=0.006）的独立预后因素,淋巴结转移是影响宫颈癌术后OS的独立预后因素（P=0.005）。2.144例狭义的局部晚期宫颈癌中60例（41.7%）接受新辅助化疗,84例未接受新辅助化疗。新辅助化疗组不良反应主要为血液毒性反应,但耐受性良好,未观察到3级以上不良反应。新辅助化疗对两组无进展生存率（P=0.453）和总生存率（P=0.933）无明显影响。3.利用基因芯片最终筛选出与细胞凋亡相关的基因HDAC6,p21（CDKN1A）进行验证,免疫组化结果显示:预后好的宫颈癌患者,HDAC6表达降低,P21表达增高,细胞增殖受抑制;预后差的宫颈癌患者,HDAC6表达增高,P21表达降低,细胞增殖;转染敲减HDAC6慢病毒的Hela细胞显着降低Hela宫颈癌细胞株HDAC6蛋白的表达。相比于对照组,CCK-8检测发现转染敲减HDAC6慢病毒的Hela细胞的增殖明显受到抑制（P<0.05）。流式细胞仪检测表明,转染敲减HDAC6慢病毒的Hela细胞凋亡细胞百分率明显高于对照组（P<0.05）。Western blot结果显示转染敲减HDAC6慢病毒的Hela细胞P21的表达提高,降低了Bcl-2的表达,但增加了Bax的表达。相比于对照慢病毒+顺铂组,转染敲减HDAC6慢病毒联合顺铂对Hela组增殖抑制作用增强,对Hela细胞诱导凋亡率明显增高,差异具有统计学意义。结论:1.淋巴脉管间隙浸润发生率与间质浸润深度及淋巴结转移率呈正相关,淋巴脉管间隙浸润是影响IB-IIA期宫颈癌预后的独立危险因素。2.对于那些能够接受根治性手术治疗及术后序贯治疗的狭义的局部晚期宫颈癌患者,紫杉醇联合铂类新辅助化疗对她们的预后及淋巴结转移率无明显改善。3.转染敲减HDAC6慢病毒显着降低Hela宫颈癌细胞株HDAC6蛋白的表达,可以抑制癌细胞的生长,诱导癌细胞发生凋亡。转染敲减HDAC6慢病毒与化疗药物具有协同作用,联合使用可以明显抑制Hela细胞的增殖,诱导细胞凋亡。这可能与敲减HDAC6后影响p21增殖和凋亡信号通路相关。
熊婧[5]（2020）在《基于芯片的儿童卵巢未成熟畸胎瘤的microRNA表达谱初步研究及分子标记物筛选》文中研究表明目的:探索儿童卵巢未成熟畸胎瘤的miRNA分子表达谱并筛选其特异性分子标记物。方法:收集儿童卵巢肿瘤组织标本共20例,其中18例为石蜡切片标本,包括卵巢囊肿2例、成熟型畸胎瘤3例、未成熟畸胎瘤6例、卵黄囊瘤3例、幼年型颗粒细胞瘤3例、无性细胞瘤1例;2例为冰冻组织标本,1例为成熟型畸胎瘤,1例为卵黄囊瘤。运用美国安捷伦公司的基因芯片检测样本表达的miRNA,分为三组进行统计学分析,主要将卵巢未成熟畸胎瘤与其他卵巢肿瘤（卵巢囊肿、成熟型畸胎瘤、卵黄囊瘤、无性细胞瘤、颗粒细胞瘤）进行比较筛选差异miRNA,并分析卵巢良性肿瘤与恶性肿瘤组间的差异miRNA、不同病理级别卵巢未成熟畸胎瘤间的差异miRNA。对得到差异miRNA进行生物信息学分析,包括在miRWalk、miRDB、DAVID数据库中进行靶基因预测,GO（Gene Ontology）分析,KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）分析,miRNA-靶基因-信号通路网络分析,探讨与儿童卵巢未成熟畸胎瘤发病、诊断、治疗及预后相关的miRNA。结果:1、基因芯片筛选差异miRNA:筛选出卵巢良恶性肿瘤组间44个差异miRNA;未成熟畸胎瘤（与其余5类肿瘤比较）特异性的13个差异miRNA;未成熟畸胎瘤不同病理级别间的18个差异miRNA。2、生物信息学分析:1)卵巢良性肿瘤与恶性肿瘤组间重要差异miRNA为miR-106b-5p、miR-20a-5p、miR-20b-5p,差异miRNA的靶基因在功能上主要参与转录及转录调节（蛋白质结合、RNA聚合酶Ⅱ核心启动子近端序列特异性DNA结合、转录因子活性、蛋白磷酸酶调节活性）,涉及的信号通路主要为癌症相关通路,参与调控轴突导向、Fox O信号通路。2)卵巢未成熟畸胎瘤的特异性miRNA的靶基因功能也主要富集在转录和转录调节,包括转录因子活性、RNA聚合酶Ⅱ转录因子活性、DNA特异序列结合、蛋白质结合。参与调控长寿调节通路、谷氨酸能突触、生理周期调节通路,涉及的靶基因主要有FOXO1、AKT3。核心miRNA包括miR-129-5p、miR-124-3p、miR-7-5p、miR-4698。3)不同病理级别（Ⅰ级VSⅡ级）卵巢未成熟畸胎瘤中的差异miRNA与神经系统发育有关,miRNA-4673、miRNA-378h、miRNA-6857-5p特异性地在Ⅰ级未成熟畸胎瘤中表达上升。相关靶基因有MAPK家族、VEGFA、HGF,参与MAPK信号通路、c AMP信号通路、神经营养因子信号通路的调控。结论:1、首次通过石蜡样品的基因芯片分析建立儿童卵巢未成熟畸胎瘤miRNA表达谱,并获得13个特异性miRNA,筛选出重要miRNA包括miR-129-5p、miR-124-3p、miR-7-5p、miR-4698,可能是鉴别卵巢未成熟畸胎瘤与其他卵巢肿瘤的生物标记物,为后续在血标本、新鲜组织标本中试验奠定了基础;2、通过差异性miRNA的生物信息学分析,对儿童卵巢未成熟畸胎瘤特异miRNA的相关靶基因功能、信号通路进行了探索,并建立miRNA-靶基因-信号通路网络,筛选出重要靶基因和miRNA。3、通过对比不同病理级别儿童卵巢未成熟畸胎瘤,获得了差异表达miRNA,并发现这些差异miRNA与神经组织的发育、分化相关,可能为病理分级诊断提供了更客观的指标选择。
朱文静[6]（2020）在《核仁小RNA-SNORD89调控卵巢癌细胞干性的作用及其机制研究》文中认为目的:卵巢癌是常见的妇科肿瘤之一,由于患者发病早期没有不适症状,70%以上的患者一经发现,已处于晚期（Ⅲ期或Ⅳ期）。因此,卵巢癌虽然发病率不高,但它仍然是最致命的妇科恶性肿瘤。根据世界卫生组织统计,每年将诊断出295414例卵巢癌患者,184799名患者将死于这种疾病,其发病率和死亡率在全世界女性肿瘤中占有很高的比例;此外,卵巢癌（尤其是晚期）对放疗和化疗都存在很大程度的耐药情况。因此,卵巢癌患者的预后并不是十分理想,其发病率占女性肿瘤的3.4%,而死亡率上升到4.4%。随着人们对肿瘤领域研究的深入,人们提出了肿瘤干细胞（Cancer Stem Cells,CSCs）理论,CSC的理论类似于肿瘤细胞的起源、治疗抵抗和免疫系统,该理论使卵巢癌的医治有了新的方向和更为优化的方法。肿瘤干细胞也属于肿瘤细胞,与普通的肿瘤细胞相比,它具有更强的自我更新能力、无限增殖能力、侵袭和迁移能力,它对肿瘤生长和复发起着至关重要作用。它与肿瘤成功治疗后的复发、肿瘤细胞的休眠、转移有着密不可分的关系,目前已在多种肿瘤中如白血病、乳腺癌、直肠癌、脑癌等中有报道。近期研究将卵巢癌定义为“干细胞疾病”,CSC可与肿瘤微环境、EMT和T细胞相互作用,增强肿瘤的生长和肿瘤治疗的耐药性。核仁小分子RNA（Small Nucleolar RNA,SNORNA）是一类普遍存在于真核生物细胞核仁的小分子非编码RNA,代谢稳定,长度在60-300个核苷酸序列。主要分为box C/D SNORNA和box H/ACA SNORNA两大类,它主要在核仁中与特定的蛋白结合形成小核仁核糖核蛋白体颗粒（Small Nucleolar Ribonucleoproteins Partical,SNORNP）,主要对核糖体RNA（Ribosomal RNA,rRNA）和其它RNA进行转录后的加工修饰,如假尿苷化修饰和2’-甲基化修饰等。SNORNA曾被人们认为是RNA转录过程中的噪音,但是随着研究的深入,人们发现SNORNA的失调与多种肿瘤的发生发展及复发预后存在较为密切的关系。SNORNA的亚群,如SNORNA42、SNORNA78、SNORNA113-1、SNORNA ACA11、SNORNA93、SNORNA U2-19等,均在各种类型的肿瘤中存在异常的表达和调节情况,通过不同方式影响各种肿瘤的发生和发展。如肺癌干细胞中的核心转录因子的表达量与SNORA42的表达量存在很大的相关性,在白血病干细胞中SNORD14D和SNORD35A的表达水平直接参与细胞的干性表型特征。因此,SNORNA在近期吸引了众多肿瘤领域研究者的注意力。目前,缺乏SNORNA在卵巢癌中研究的报道。Notch1基因编码一类高度保守的细胞膜蛋白受体。Notch1信号通路可影响细胞生物学行为的多个过程,尤其是与肿瘤发生发展密切相关的细胞功能,如多能干细胞的分化、细胞凋亡、细胞增殖等。文献报道,Notch1的促癌作用与c-Myc相关,c-Myc在多种肿瘤中都可作为Notch1的直接作用靶点。多种基因经过调控Notch1或c-Myc而影响肿瘤的进展。但是,缺乏SNORNA与Notch1相关性的研究。因此,本实验通过分析TCGA数据库中379例卵巢癌患者的资料,筛选出影响卵巢癌患者预后的SNORNA,经过体外实验检测筛选出的SNORNA对卵巢癌细胞的干性、生物学行为的影响,并最终确定SNORD89可以通过靶向Notch1/c-Myc通路影响卵巢癌的发生发展。方法:综合分析TCGA数据库中379例卵巢癌患者的临床资料和RNA-Seq测序数据,采用Log-rank（Mantel-Cox）法筛选出在患者体内表达量高并与患者预后相关的SNORNA。将卵巢癌患者按照患者不同的临床分期进行分组分为Ⅲ期和Ⅳ期,再分别对比Ⅲ期和Ⅳ期患者中SNORNA的表达量的高低之间的患者生存时间和生存状态的差异,采用卡方检验和非配对t检验对比筛选出的SNORNA的表达量在卵巢癌患者同一临床病理参数不同分组间的差异情况,并同时采用单因素和多因素生存分析两种方法进行筛选影响卵巢癌患者预后的临床病理参数。在本项研究中,采用无血清非黏附悬浮培养的方法培养卵巢癌贴壁细胞（OVCAR-3,OV）一段时间后,将其诱导成为卵巢癌干细胞（OVCAR-3S,OS）,卵巢癌干细胞的鉴定是通过定量反转录聚合酶连锁反应（Quantificational Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR）,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术实验检测诱导成功的卵巢癌干细胞中干性标志物的表达量来完成。通过对比多个卵巢正常上皮细胞Hosepic,卵巢癌细胞OV和卵巢癌干细胞OS基因芯片中SNORNA的表达量的差异,筛选出在卵巢癌干细胞芯片中表达量升高的SNORNA,采用qRTPCR和琼脂糖凝胶电泳两种不同的方法验证芯片中筛选出的SNORNA的表达量。通过在OV,CAOV-3（CA）和OS三种卵巢癌细胞系中转染SNORNA的过表达和沉默质粒分别构建OV过表达SNORNA,CA过表达SNORNA和OS沉默SNORNA的卵巢癌细胞系,并采用qRT-PCR的方法确定卵巢癌细胞中SNORNA过表达和沉默效率最高的转染质粒的时间点。采用qRT-PCR,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术三种不同的方法检测过表达SNORNA后的OV细胞和沉默SNORNA后的OS细胞中表征干性表型的干性标志物的表达量的变化情况。采用流式细胞术检测干扰SNORNA基因表达后卵巢癌细胞OV和卵巢癌干细胞OS的细胞周期的变化情况,通过CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验检测过表达和沉默SNORNA后,对卵巢癌细胞和卵巢癌干细胞的细胞增殖能力和肿瘤恶性程度的影响。采用克隆形成实验检测沉默SNORNA后对卵巢癌干细胞自我更新能力的影响,采用划痕实验和Transwell迁移实验检测干扰SNORNA后,分别选择不同的时间点观察卵巢癌细胞和卵巢癌干细胞侵袭迁移能力的改变。采用qRT-PCR,琼脂糖凝胶电泳和Western blot检测卵巢癌细胞,卵巢癌干细胞及干扰SNORNA后,细胞中Notch1和c-Myc基因表达量和蛋白表达量的变化。结果:1.SNORD89与SNORD116-4高表达的卵巢癌患者预后更差:分别将Ⅲ期和Ⅳ期卵巢癌患者再按SNORD89的表达量继续分组,结果表明SNORD89的高表达水平提示Ⅲ期和Ⅳ期卵巢癌患者的不良预后,而且SNORD89表达量对卵巢癌患者预后的影响大于卵巢癌临床分期对患者预后的影响;SNORD116-4的高表达水平提示Ⅲ期卵巢癌患者的不良预后,但是在Ⅳ期患者中SNORD116-4高表达水平的卵巢癌患者预后却较好,因此,SNORD116-4的表达量不能很好的同时一致的在卵巢癌Ⅲ期和Ⅳ期患者中指示卵巢癌患者的预后。SNORD89的表达量与卵巢患者的年龄和治疗效果有关,年龄大、治疗效果差的卵巢癌患者肿瘤组织中SNORD89的表达量呈现高表达。采用单因素和多因素COX生存分析的方法分析卵巢癌患者的预后影响因素,SNORD89的表达量、患者的年龄、肿瘤大小是影响卵巢癌患者总生存期的非独立风险因素,患者的种族、肿瘤淋巴转移情况是影响卵巢癌患者总生存期的独立风险因素。患者年龄是影响患者无进展生存期的非独立风险因素,淋巴转移情况是影响患者无进展生存期的独立风险因素。2.Hosepic,卵巢癌细胞和卵巢癌干细胞的基因芯片及qRT-PCR、琼脂糖凝胶电泳凝胶实验结果显示SNORD89在卵巢癌干细胞中的表达量高于卵巢癌细胞和卵巢上皮细胞。卵巢癌细胞中的干性标志物基因CD133、CD44和Nanog呈现高表达。过表达SNORD89后,干性标志物表达量增加,沉默SNORD89后,干性标志物的表达量降低。3.SNORD89与细胞周期相关的多个基因存在共表达。过表达SNORD89后,S期的卵巢癌细胞数量增加,G1期和G2期卵巢癌细胞数量降低;沉默SNORD89后,G1期和S期的卵巢癌细胞数量减少,G2期卵巢癌细胞数量增加。4.过表达SNORD89后,增强了卵巢癌细胞的增殖能力和肿瘤的恶性程度,沉默SNORD89后,卵巢癌干细胞的增殖能力和自我更新能力降低;SNORD89的过表达提高了卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,而SNORD89的沉默则降低了卵巢癌细胞的迁移能力。5.过表达SNORD89后,Notch1基因及其靶标基因c-Myc的表达量增加,蛋白的表达量也增加;SNORD89沉默后,Notch1基因及其靶基因c-Myc表达下降,蛋白表达也下降。结论:1.卵巢癌患者肿瘤组织中SNORD89的表达量与患者的预后密切相关,SNORD89的表达量与患者的年龄呈正相关。2.通过无血清非黏附悬浮培养卵巢癌细胞OV可以成功富集具有自我更新能力、侵袭迁移能力、分化潜能及高表达干性标志物特性的卵巢癌干细胞OS。3.SNORD89在卵巢癌干细胞中高表达。4.SNORD89可以促进卵巢癌细胞的干性特征。5.SNORD89干扰卵巢癌细胞的细胞周期,促进卵巢癌细胞的增殖能力,自我更新能力和侵袭迁移能力。6.SNORD89通过靶向Notch1/c-Myc通路促进卵巢癌细胞的干性表型。
李馨慧[7]（2020）在《CircNRIP1靶向抑制miR-629-3p调控PTP4A1影响宫颈癌细胞的生物学行为的机制研究》文中研究表明研究目的:宫颈癌（cervical cancer）是我国最常见的妇科恶性肿瘤之一,据中国国家癌症登记中心2018年最新数据估算,2014年我国宫颈癌新发病例可达10.2万例,死亡人数约为3.04万。此外,目前普遍认为高危型人乳头瘤病毒（Human Papilloma Virus）持续感染是宫颈癌发生的必要条件。但HPV感染的患者只有一部分会进展为宫颈癌,这提示我们还有其他的一些重要因素参与到宫颈癌的发生发展过程中。目前,随着经济水平的提高,妇女保健意识的增强,宫颈癌筛查的普及以及HPV疫苗的应用,宫颈癌在发达国家的死亡率已呈现出下降的趋势。越来越多的宫颈癌患者在早期被发现,增加了患者手术治愈的机会。但近20年的临床流行病学调查统计发现,宫颈癌患者呈现出年轻化趋势,患者对治疗后生活质量的要求更加迫切。在这种情况下,如何全面评估患者病情,选择合理、个体化的治疗方案,便成为妇科肿瘤医生亟待解决的问题。除此之外,现在临床上依然有许多患者在确诊时便已是晚期,失去了手术治疗的机会,但目前还缺少针对宫颈癌的靶向治疗药物。因此,深入研究宫颈癌的发生发展分子机制,寻找新的预防、诊断以及潜在的治疗靶点便显得至关重要。已有大量的研究显示circRNA在肿瘤的发生发展过程中发挥了重要作用,然而其在宫颈癌中的研究却鲜有报道。本研究目的是探索circRNA在宫颈癌中的作用机制及其在宫颈癌中的潜在临床意义。研究方法:1、本研究借助成熟的基因芯片技术,以宫颈永生化上皮细胞系H8及宫颈癌细胞系SiHa为样本,筛选出在两种细胞系中差异表达的circRNAs。接下来我们通过qRT-PCR及Sanger Sequencing方法对差异表达明显的circRNAs进行验证。我们挑选了其中差异表达最明显的circNRIP1进行了进一步的研究。我们通过qRT-PCR检测了circNRIP1在40对宫颈癌组织及癌旁组织中的表达,并分析其表达水平与患者临床病理参数的关系。2、我们构建了circNRIP1过表达及敲减慢病毒载体,并成功构建了慢病毒稳转宫颈癌HeLa和SiHa细胞系。接下来我们通过CCK-8实验及EdU实验检测circNRIP1过表达或敲减后细胞的增殖能力的变化;细胞划痕实验检测circNRIP1表达水平对细胞迁移能力的影响;Transwell Matrigel实验检测circNRIP1表达水平对细胞侵袭能力的影响。3、通过基于Arraystar自带miRNA预测软件以及生物信息学软件RNAhybrid,我们筛选出5个与circNRIP1具有结合位点的mi RNAs。通过RT-PCR我们检测了宫颈癌细胞系中circNRIP1表达水平变化对这5个miRNAs表达水平的影响。我们发现miR-629-3p可以被circNRIP1负性调控。我们又通过进一步双荧光素酶实验验证了两者之间的直接相互作用。接下来,我们通过qRT-PCR检测了宫颈癌组织及癌旁组织中miR-629-3p的表达水平,并分析其表达水平与患者临床病理参数的关系以及与circNRIP1表达水平的相关性。我们下一步通过细胞功能实验包括CCK8实验、EdU实验、细胞划痕实验以及Transwell Matrigel实验检测了miR-629-3p对宫颈癌细胞系生物学行为的影响。之后我们通过生物信息学分析软件TargetScan预测了miR-629-3p的潜在靶基因PTP4A1,所以我们接下来通过qRT-PCR、Western Blot检测了miR-629-3p对PTP4A1的mRNA及蛋白表达的影响。通过双荧光素酶实验证实了两者之间的相互作用。最后我们通过circNRIP1及miR-629-3p共转染宫颈癌细胞系、细胞功能实验以及Western Blot实验检测miR-629-3p是否能够恢复circNRIP1对细胞功能及蛋白表达的影响。最后通过在裸鼠皮下注射circNRIP1过表达HeLa细胞及对照细胞,构建裸鼠荷瘤模型,观测小鼠体内移植瘤的变化以及组化结果,验证circNRIP1在体内宫颈癌细胞中的作用。研究结果:1.circNRIP1在宫颈癌细胞系SiHa中表达水平高于宫颈永生化上皮细胞系H8,进一步在宫颈癌组织及癌旁组织中验证,发现circNRIP1在宫颈癌组织中表达水平高于癌旁组织,且与淋巴脉管间质浸润具有相关性,差异均具有统计学意义。2.circNRIP1过表达可以促进宫颈癌细胞的增殖能力,而敲低circNRIP1的表达水平则会降低宫颈癌细胞的增殖能力。细胞划痕实验证实了circNRIP1能够促进细胞迁移,Transwell Matrigel实验结果显示circNRIP1过表达可以增加穿膜细胞数,即促进宫颈癌细胞的侵袭能力,而circNRIP1敲减则具有相反的作用。3.生信分析软件结果显示circNRIP1与miR-629-3p具有潜在的结合位点。进一步qRT-PCR实验证实了circNRIP1可以负性调控miR-629-3p的表达水平,双荧光素酶实验结果显示miR-629-3p可以显着降低野生型circNRIP1载体的荧光强度,而不影响突变型载体的荧光强度。进一步对转染了miR-629-3p、inh-629-3p以及其各自对照组的细胞进行了生物学行为检测,CCK8及EdU结果显示miR-629-3p抑制了细胞的增殖,细胞划痕实验显示miR-629-3p组细胞迁移速度低于对照组,Transwell Matrigel实验结果显示miR-629-3p组穿膜细胞数与对对照组相比有所减少。于此同时inh-629-3p对宫颈癌细胞系的影响与miR-629-3p正相反,差异均具有统计意义。接下来TargetScan数据库预测PTP4A1是miR-629-3p的潜在靶基因,qRT-PCR、Western Blot结果显示miR-629-3p可以调控PTP4A1 mRNA及其蛋白的表达。双荧光素酶实验显示,miR-629-3p可以降低WT-PTP4A1组的荧光强度而不影响MUT-PTP4A1组的荧光强度。最后我们通过circNRIP1及miR-629-3p共转染宫颈癌细胞系,发现miR-629-3p可以降低circNRIP1过表达对细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用,而inh-629-3p可以恢复sh-circ NRIP1对细胞的增殖、迁移及侵袭能力的抑制。Western Blot实验证实了circNRIP1可以调控miR-629-3p靶标PTP4A1以及其下游ERK1/2通路相关蛋白的表达水平。最后,裸鼠荷瘤实验发现circNRIP1可以促进移植瘤在小鼠体内的生长,且免疫组化结果显示circNRIP1过表达组的移植瘤中PTP4A1的表达水平高于其对照组。研究结论:1.CircNRIP1在宫颈癌癌组织中呈高表达且与淋巴脉管间质浸润具有相关性。2.CircNRIP1能够促进宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。3.MiR-629-3p在宫颈癌组织中低表达,并能够通过负性调控靶基因PTP4A1调控ERK1/2通路,从而抑制宫颈癌细胞的迁移及侵袭能力。4.CircNRIP1通过负性调控miR-629-3p从而调控PTP4A1的表达,并通过ERK1/2通路促进宫颈癌细胞的迁移及侵袭。
毕峥[8]（2020）在《SAA、CA125、HE4联合检测对卵巢肿瘤诊断价值的研究》文中研究表明目的:探讨血清淀粉样蛋白A（Serum Amyloid A,SAA）、糖类抗原125（Carbohydrate Antigen 125,CA125）、附睾蛋白4（Human Epididymis Protein 4,HE4）联合检测对卵巢肿瘤诊断的临床价值。方法:收集2018年1月-2020年3月在大连大学附属中山医院以“卵巢肿物”为入院诊断行手术治疗的住院患者115例,其中卵巢恶性肿瘤组56例;卵巢良性肿瘤组59例。选取同时期于门诊行健康体检的女性60例作为健康对照组。卵巢恶性肿瘤组和卵巢良性肿瘤组于术前1日晨空腹采集静脉血,健康对照组于体检当日晨空腹采集静脉血。采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清SAA浓度,电化学发光法测定血清CA125、HE4浓度。比较并分析三项标志物在三组人群血清中的表达水平和检测阳性率;比较三项标志物在不同手术病理分期的卵巢恶性肿瘤患者中的表达情况;比较三项标志物对卵巢肿瘤诊断的灵敏度、特异度、受试者工作特征曲线（ROC）下面积,探讨三项标志物单项检测及联合检测对卵巢肿瘤的诊断效能。结果:1.在卵巢恶性肿瘤组、卵巢良性肿瘤组、健康对照组中,血清SAA表达水平中位数分别为109.2mg/L、4.2mg/L和4.8mg/L;血清CA125表达水平中位数分别为127.6U/ml、17.1U/ml、16.3U/ml;血清HE4表达水平中位数分别为128.4pmol/L、43.1pmol/L、35.2pmol/L。卵巢恶性肿瘤组血清SAA、CA125、HE4水平均高于卵巢良性肿瘤组和健康对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,卵巢良性肿瘤组血清SAA、CA125、HE4水平与健康对照组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。卵巢恶性肿瘤组血清SAA、CA125、HE4单项检测及三项联合检测的阳性率分别为83.9%、91.1%、67.9%、98.2%;卵巢良性肿瘤组血清SAA、CA125、HE4单项检测及三项联合检测的阳性率分别为5.1%、25.0%、10.20%、39.0%;健康对照组SAA、CA125、HE4单项检测及三项联合检测的阳性率分别为5.0%、10.0%、3.3%、13.3%。卵巢恶性肿瘤组血清SAA、CA125、HE4单项检测及三项联合检测的阳性率均高于卵巢良性肿瘤组和健康对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,卵巢良性肿瘤组血清CA125和三项联合检测的阳性率高于健康对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,卵巢良性肿瘤组血清SAA、HE4检测阳性率略高于健康对照组,但差异无统计学意义（P>0.05）。2.卵巢恶性肿瘤早期（I-II期）组血清SAA、CA125、HE4浓度中位数分别为18.8mg/L、70.4U/ml、58.8pmol/L;晚期（III-IV期）组血清SAA、CA125、HE4浓度中位数分别为149.3mg/L、356.0U/ml、289.5pmol/L。晚期组血清SAA、CA125、HE4表达水平高于早期组,差异有统计学意义（P<0.05）。卵巢恶性肿瘤患者血清SAA表达水平与手术病理分期呈弱正相关（r=0.31,P<0.05）,CA125表达水平与手术病理分期呈中度正相关（r=0.53,P<0.05）,HE4表达水平与手术病理分期呈强正相关（r=0.66,P<0.05）。3.SAA、CA125、HE4三项标志物进行不同组合,通过ROC分析各组合对卵巢肿瘤的诊断效能,结果显示:各组合对卵巢恶性肿瘤的诊断效能均较高（P<0.05）。单项检测时,SAA的诊断效能最高（灵敏度为83.9%,特异度为94.9%,AUC=0.93,95%CI=0.88-0.98,P<0.05）。在联合检测的组合中,两两联合检测的和三项联合检测的AUC较单项检测高,差异有统计学意义（P<0.05）,联合检测的诊断效能高于单项检测。两项联合检测的灵敏度较单项检测的灵敏度有所增高,差异无统计学意义（P>0.05）,特异度较单项检测有所降低,差异无统计学意义（P>0.05）。三项联合检测诊断效能最高（灵敏度为98.2%,特异度为74.0%,AUC=0.99,95%CI=0.98-1.00,P<0.05）。此时灵敏度较各标志物单项检测和两两联合检测时升高,差异有统计学意义（P<0.05）。特异度较各标志物单项检测和两两联合检测时降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1.卵巢恶性肿瘤组血清SAA、CA125、HE4表达水平和阳性率高于卵巢良性肿瘤组及健康对照组。2.卵巢恶性肿瘤组血清SAA、CA125、HE4表达水平与手术病理分期呈正相关。3.SAA、CA125和HE4联合检测对卵巢肿瘤早期筛查的诊断效能最优。
徐昕[9]（2019）在《差异表达的TFF3通过激活PI3K/AKT通路参与宫颈腺癌的发病机制》文中研究表明目的:本研究验证了TFF3基因在宫颈腺癌和宫颈鳞癌中存在表达差异,在宫颈腺癌中TFF3明显高表达,进一步研究TFF3可以调节宫颈腺癌细胞生物学行为,并且能够激活PI3K/AKT信号通路及其下游基因Twist1,从而阐明TFF3在宫颈腺癌发生发展中的作用,为宫颈腺癌发病机制的研究提供新的实验依据。方法:以宫颈腺癌细胞系（Hela细胞）和宫颈鳞癌细胞系（Siha细胞）以及宫颈腺癌和鳞癌组织标本为研究对象。通过实时荧光定量PCR检测宫颈腺癌和宫颈鳞癌细胞系及组织中的TFF3mRNA表达水平,免疫组化实验用以检测宫颈腺癌和宫颈鳞癌组织中TFF3蛋白的表达差异。利用生物信息学方法分析TFF3可能的下游基因及可能存在的信号调节通路。将TFF3细胞因子以浓度不同分为四组0ng/ml、100ng/ml、200 ng/ml、500 ng/ml,分别处理宫颈腺癌细胞系,利用CCK-8法检测处理后Hela细胞的增殖能力,利用Transwell小室检测处理后细胞的迁移能力。TFF3细胞因子和PI3K/AKT通路抑制剂（LY294002）处理Hela细胞,设置TFF3组、抑制剂组、共同作用组（同时加入两种处理因素）和对照组（未进行处理）,分别利用CCK-8实验和Transwell小室研究不同因素处理后Hela细胞增殖和迁移能力的改变,Western Blot方法用以观察四组实验中Hela细胞的AKT、pAKT及Twist1蛋白表达情况,流式细胞学计数用以检测不同作用因素处理对Hela细胞凋亡的影响。采用SPSS17.0统计学软件处理结果。结果:1.实时荧光定量PCR的结果表明,在宫颈腺癌细胞中TFF3mRNA的表达水平明显高于宫颈鳞癌细胞（p<0.05）,宫颈腺癌与鳞癌组织标本中存在同样的TFF3mRNA表达差异（p<0.05）,差异均有统计学意义。2.免疫组化结果进一步证实了TFF3蛋白在宫颈腺癌与鳞癌中存在表达差异,且在宫颈腺癌中的表达明显增高（p<0.05）,差异有统计学意义。3.利用生物信息学方法对TFF3基因进行分析,STRING10蛋白互作分析显示TFF3与Twist1蛋白间存在相互作用,KEGG通路分析结果提示TFF3基因与PI3K/AKT信号通路存在调节关系。4.TFF3细胞因子处理Hela细胞后,随着作用时间的增长,Hela细胞的增殖逐渐增强（p<0.05）,且随TFF3浓度的增高Hela细胞增殖能力增强（p<0.05）。不同浓度TFF3细胞因子作用Hela细胞后,其迁移能力随TFF3浓度的升高而增强（p<0.01）。5.利用抑制剂LY294002和TFF3分别处理Hela细胞后,与对照组相比,TFF3组Hela细胞增殖明显升高,抑制剂组细胞增殖明显减弱,共同作用组细胞增殖能力处于两者之间,其中24h作用时间的结果最为明显（p<0.05）。不同处理因素作用Hela细胞后,其迁移能力与对照组相比,TFF3组明显增强,抑制剂组明显减弱（p<0.05）,共同作用组Hela细胞迁移能力与TFF3组相近明显强于抑制剂组和对照组。6.Western Blot实验结果表明,随TFF3细胞因子浓度增高,pAKT蛋白表达逐渐增多,TFF3浓度为200ng/ml时对pAKT的激活作用最强（p<0.05）,浓度为500ng/ml时激活作用减弱。随处理时间增长,TFF3激活pAKT蛋白表达的作用增强,作用时间为30分钟激活做最强（p<0.05）,其后随时间延长TFF3的激活作用逐渐减弱。AKT蛋白表达不受TFF3细胞因子作用的影响。TFF3和抑制剂共同处理Hela细胞后,与对照组相比,TFF3组pAKT和Twist1蛋白的表达均增强,而抑制剂组pAKT和Twist1蛋白表达明显降低（p<0.05）,共同作用组pAKT和twist1的蛋白表达量介于两组之间,Twist1的蛋白表达明显高于对照组（p<0.05）。AKT蛋白表达在各处理组之间无明显差异。7.流式细胞学计数分析结果表明,TFF3和抑制剂分别作用Hela细胞后,抑制剂组Hela细胞凋亡比例明显增多（p<0.01）,TFF3组Hela细胞凋亡明显减弱,共同作用组细胞凋亡比例处于两处理组之间（p<0.05）,与对照组细胞凋亡比例相比差异均有统计学意义。结论:在宫颈腺癌中存在高表达的TFF3基因,能够通过激活PI3K/AKT信号通路增强Hela细胞增殖和迁移的能力并抑制其凋亡,并且能够提高Twist1基因的表达,为宫颈腺癌发病分子机制的研究提供新的理论依据。
芮小慧[10]（2019）在《长链非编码RNA C5orf66-AS1在宫颈癌发生中的作用及其机制研究》文中研究说明背景宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,已成为重要的公共健康问题。宫颈癌发病率占女性恶性肿瘤的第二位,其死亡率占女性生殖系统恶性肿瘤首位。目前,手术、化疗和放疗是宫颈癌最常用的治疗手段,但由于多数宫颈癌细胞对化疗药物具有耐药性,导致化疗药物对宫颈癌的治疗效果较差。而对于预后较差的晚期及复发性宫颈癌,目前也同样缺乏有效的治疗方法。因此,探索创新型治疗方法可能是宫颈癌治疗突破的关键。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,Lnc RNA）是一类超过200个核苷酸,并具有与m RNA结构特征相似的非编码RNA,大多数是由RNA聚合酶II转录产生的。Lnc RNA可形成复杂的二级结构,可提供与多个核酸或蛋白质结合的空间。Lnc RNA虽然不编码蛋白质,但其可通过转录和转录后水平调控影响多种基因的表达水平。有研究发现,Lnc RNA的表达与多种肿瘤密切相关,如结肠癌、乳腺癌、肝癌等,但在宫颈癌中的机制仍尚未明确。方法:本研究采用TCGA数据库对3对宫颈癌组织和相应的癌旁组织进行差异Lnc RNA的筛选,对筛选出的5个上调和5个下调最明显的lnc RNA进行quantitative real-time reverse transcription PCR（q RT-PCR）验证,最终选取lnc RNA C5orf66-AS1作为研究对象进行研究。通过在体内体外改变lnc RNA C5orf66-AS1的表达,观察其对宫颈癌生物学行为的影响,探讨lnc RNA C5orf66-AS1在宫颈癌增殖中的关键基因,为有效防治宫颈癌提供新的理论依据。结果:1.Lnc RNA C5orf66-AS1在宫颈癌组织和细胞中显着高表达。2.在Si Ha和C-4 I中下调C5orf66-AS1表达后,细胞增殖能力显着下降,而当Si Ha和C-4 I中上调C5orf66-AS1表达后,增殖能力显着上升。此外,在细胞周期实验发现下调C5orf66-AS1的细胞中G1/G0期细胞明显增加,而G2/S期细胞减少;而上调C5orf66-AS1的细胞中G1/G0期细胞明显减少,而G2/S期细胞明显增多。在宫颈癌细胞株Si Ha和C-4 I中下调C5orf66-AS1的表达,可显着促进宫颈癌细胞的凋亡。3.下调C5orf66-AS1的表达水平可显着促进mi R-637的表达;反之,上调C5orf66-AS1的表达水平可显着下调宫颈癌mi R-637的表达。随后我们构建了C5orf66-AS1-WT和与mi R-637结合位点突变掉的C5orf66-AS1-MUT的荧光报告素酶质粒。与对照组相比,上调mi R-637的表达水平可显着降低Si Ha细胞中共转染C5orf66-AS1-WT质粒的荧光素酶活性,而上调mi R-637的表达水平对共转染C5orf66-AS1-MUT质粒的荧光素酶活性无影响,说明C5orf66-AS1可与mi R-637直接结合。我们通过RIP实验检测C5orf66-AS1和mi R-637是否可以在细胞中结合。结果显示,相对于对照Ig G组,C5orf66-AS1和mi R-637优先富集在抗Ago2组中。随后我们通过q RT-PCR检测了20例宫颈癌和癌旁组织中mi R-637的表达,发现mi R-637在宫颈癌中低表达。mi R-637在宫颈癌细胞株中的表达比正常宫颈上皮细胞株表达低。4.在Si Ha和C-4 I中上调或下调mi R-637的表达,发现RING1的m RNA和蛋白表达发生改变。随后我们构建了RING1 3’UTR-WT和与mi R-637结合位点突变掉的RING1 3’UTR-MUT的荧光报告素酶质粒。随后免疫荧光素酶报告实验的结果发现,与对照组相比,上调mi R-637的表达水平可显着降低Si Ha细胞中共转染RING1 3’UTR-WT质粒的荧光素酶活性,而上调mi R-637的表达水平对共转染RING1 3’UTR-MUT质粒的荧光素酶活性无影响,说明RING1可与mi R-637直接结合。5.在Si Ha和C-4 I细胞系中上调或下调C5orf66-AS 1的表达,RING1的m RNA和蛋白表达水平分别显着增加或降。6.单独过表达mi R-637可明显抑制Si Ha或C-4 I细胞的增殖能力,且在过表达C5orf66-AS1的细胞中同时上调mi R-637时,mi R-637能部分逆转C5orf66-AS1引起的细胞增殖功能改变。7.单独过表达RING1可明显增强Si Ha或C-4 I细胞的增殖能力,且在过表达RING1的细胞中同时上调mi R-637时,RING1能完全逆转mi R-637引起的细胞增殖功能改变。8.在实验动物中下调lnc RNA C5orf66-AS1可抑制肿瘤的生长。结论:Lnc RNA C5orf66-AS1作为ce RNA通过吸附mi R-637调控RING1对宫颈癌增殖、凋亡和细胞周期作用的影响,为探索宫颈癌的发病机制和寻找有效的治疗靶点提供新的理论和实验依据。
二、基因芯片在妇科肿瘤中的应用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、基因芯片在妇科肿瘤中的应用（论文提纲范文）
（1）基于生物信息学对子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌发病相关基因的初步研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 基于生物信息学对子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌的发病相关基因的筛选 |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 第二部分 验证RGS2、MYLK在子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌的表达情况 |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4.讨论 |
| 结论(全文) |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 子宫内膜异位症相关性卵巢癌研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）KIF15对卵巢癌增殖和凋亡的影响及相关调控网络的生物信息学分析（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 卵巢癌组织基因表达谱数据挖掘和生物信息学方法进行目标基因筛选 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 KIF15在卵巢癌组织中的表达分析以及其对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 KIF15在卵巢癌中调控网络的生物信息学分析 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 Kinesin家族蛋白在肿瘤中的作用及Kinesin靶向治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）miR-152、miR-182在子宫内膜组织中的表达及临床意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 研究材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.1.1 子宫内膜癌组 |
| 2.1.2 子宫内膜不典型增生组 |
| 2.1.3 正常子宫内膜组 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器设备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 标本的采集与处理 |
| 2.4.2 提取组织总RNA |
| 2.4.3 总RNA浓度与质量检测 |
| 2.4.4 Poly(A)Tailing |
| 2.4.5 逆转录反应 |
| 2.4.6 获取引物方法 |
| 2.4.7 RT-qPCR反应 |
| 2.5 统计学方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 RT-qPCR实验结果 |
| 3.2 ROC曲线分析结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 研究的不足及展望 |
| 参考文献 |
| 综述 MicroRNA-152在妇科生殖道恶性肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）探讨影响宫颈癌患者的预后因素及其机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第一章 综述 |
| 1.1 淋巴脉管间隙浸润在早期宫颈癌中的研究进展 |
| 1.1.1 淋巴脉管间隙浸润的定义和分类 |
| 1.1.2 淋巴脉管间隙浸润与淋巴结转移的关系 |
| 1.1.3 淋巴脉管间隙浸润对预后的影响 |
| 1.1.4 小结 |
| 1.2 新辅助化疗在宫颈癌中的应用进展 |
| 1.2.1 新辅助化疗的理论基础和起源 |
| 1.2.2 新辅助化疗序贯放疗与单纯放疗的比较 |
| 1.2.3 新辅助化疗序贯手术与放疗的比较 |
| 1.2.4 新辅助化疗序贯手术与单纯手术的比较 |
| 1.2.5 化疗方案的选择 |
| 1.2.6 新辅助化疗的主要的给药途径 |
| 1.2.7 小结 |
| 1.3 组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)在宫颈癌中的研究进展.. |
| 1.3.1 HDACi的分类及治疗特点 |
| 1.3.2 HDACi抗肿瘤机制 |
| 1.3.3 HDACi在宫颈癌中的机制研究 |
| 1.3.4 小结 |
| 第二章 淋巴脉管间隙浸润在IB-IIA期宫颈癌治疗中的意义 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 研究设计与患者资料 |
| 2.2.2 随访 |
| 2.2.3 统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 患者的基线特征 |
| 2.3.2 生存情况 |
| 2.3.3 患者接受治疗情况 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 新辅助化疗在局部晚期宫颈癌中的价值分析 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 研究设计与患者资料 |
| 3.2.2 新辅助化疗 |
| 3.2.3 手术治疗 |
| 3.2.4 术后辅助治疗 |
| 3.2.5 随访 |
| 3.2.6 统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 患者的基线特征 |
| 3.3.2 生存情况 |
| 3.3.3 总生存率和无进展生存率的多变量分析 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 HDAC6 通过p21 信号通路抑制Hela细胞增殖的机制研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 组织样本来源的选择 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.2.4 主要试剂的配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 Dateset数据库中宫颈癌放化疗抵抗基因的筛选 |
| 4.3.2 免疫组织化学法测定蛋白表达 |
| 4.3.3 细胞培养 |
| 4.3.4 顺铂药物浓度筛选 |
| 4.3.5 慢病毒设计及合成 |
| 4.3.6 慢病病毒感染细胞 |
| 4.3.7 使用Real-time quantitative PCR检测HDCA6在Hela细胞中mRNA的表达丰度及目的基因的转染率 |
| 4.3.8 CCK8 法检测细胞增殖 |
| 4.3.9 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 4.3.10 Western blot检测蛋白表达 |
| 4.4 数据处理及统计分析 |
| 4.5 实验结果 |
| 4.5.1 基因筛选 |
| 4.5.2 免疫组化结果 |
| 4.5.3 目的基因的转染及效果确认 |
| 4.5.4 顺铂药物浓度筛选 |
| 4.5.6 转染敲减HDAC6 慢病毒和(或)顺铂对肿瘤细胞凋亡的影响 |
| 4.5.7 转染敲减HDAC6 慢病毒对相关凋亡蛋白表达的影响 |
| 4.6 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 创新点及不足 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 博士期间发表的文章 |
| 致谢 |
（5）基于芯片的儿童卵巢未成熟畸胎瘤的microRNA表达谱初步研究及分子标记物筛选（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRCAT |
| 前言 |
| 第一部分 基于芯片的差异性miRNA筛选 |
| 一、实验样品与方法 |
| 二、结果 |
| 三、小结 |
| 第二部分 差异miRNA生物信息研究 |
| 一、研究对象和方法 |
| 二、结果 |
| 三、小结 |
| 讨论 |
| 全文结论 |
| 创新性与不足 |
| 参考文献1 |
| 文献综述 儿童青少年卵巢恶性生殖细胞肿瘤分子水平研究进展 |
| 参考文献2 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间已录用的论文 |
| 攻读硕士学位期间承担的科研项目 |
（6）核仁小RNA-SNORD89调控卵巢癌细胞干性的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:基于TCGA数据库探究卵巢癌中SNORNA表达及临床意义分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 TCGA卵巢癌相关数据的下载 |
| 2.2.2 SNORNA的表达量与卵巢癌患者生存时间相关性的分析 |
| 2.2.3 SNORNA的表达量与卵巢癌患者临床病理参数关系的分析 |
| 2.2.4 影响卵巢癌患者预后的临床病理参数的分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 TCGA数据库中卵巢癌患者的临床数据提示卵巢癌患者的预后差 |
| 3.2 SNORD89与卵巢癌预后相关 |
| 3.3 SNORD89的表达量与卵巢癌患者的临床病理参数相关 |
| 3.4 卵巢癌患者预后影响因素的分析结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分:SNORD89在卵巢癌干细胞中高表达并促进卵巢癌细胞的干性 |
| 1 前言 |
| 2 材料方法 |
| 2.1 实验材料和试剂 |
| 2.1.1 细胞来源 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 卵巢癌贴壁细胞的复苏与培养 |
| 2.2.2 卵巢癌贴壁细胞的传代与冻存 |
| 2.2.3 卵巢癌干细胞的诱导 |
| 2.2.4 卵巢癌干细胞的培养与传代 |
| 2.2.5 细胞中总RNA的提取 |
| 2.2.6 mRNA逆转录 |
| 2.2.7 SNORNA逆转录 |
| 2.2.8 PCR扩增反应 |
| 2.2.9 RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.2.10 质粒扩增实验 |
| 2.2.11 质粒的提取 |
| 2.2.12 细胞转染实验 |
| 2.2.13 流式细胞术CD133抗体表达量的检测 |
| 2.2.14 实验所需溶液的配制 |
| 3 结果 |
| 3.1 卵巢癌干细胞的诱导及干性鉴定结果 |
| 3.2 SNORD89在卵巢癌干细胞中高表达 |
| 3.3 基因芯片结果的实验验证 |
| 3.4 干扰SNORD89,对卵巢癌细胞和干细胞转染效率的验证 |
| 3.5 干扰SNORD89后,对卵巢癌细胞和卵巢癌干细胞干性的影响 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 SNORD89的异常表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料方法 |
| 2.1 实验材料和试剂 |
| 2.1.1 细胞来源 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 卵巢癌贴壁细胞的复苏与培养 |
| 2.2.2 卵巢癌贴壁细胞的传代与冻存 |
| 2.2.3 卵巢癌干细胞的诱导 |
| 2.2.4 卵巢癌干细胞的培养与传代 |
| 2.2.5 细胞转染实验 |
| 2.2.6 流式细胞术测定细胞周期 |
| 2.2.7 CCK8细胞增殖能力检测实验 |
| 2.2.8 平板克隆形成实验 |
| 2.2.9 软琼脂克隆形成实验 |
| 2.2.10 球囊形成实验 |
| 2.2.11 划痕实验 |
| 2.2.12 肿瘤细胞迁移实验 |
| 2.2.13 肿瘤迁移实验Transwell小室的清洗 |
| 2.2.14 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SNORD89对卵巢癌细胞周期和增殖能力的影响 |
| 3.2 SNORD89对卵巢癌细胞克隆形成能力和自我更新能力的影响 |
| 3.3 SNORD89对卵巢癌细胞侵袭迁移能力的影响 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 SNORD89 通过调控Notch1/c-Myc通路促进卵巢癌细胞的干细胞表型511前言 |
| 1 前言 |
| 2 材料方法 |
| 2.1 实验材料和试剂 |
| 2.1.1 细胞来源 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 卵巢癌细胞的复苏与培养 |
| 2.2.2 卵巢癌贴壁细胞的传代与冻存 |
| 2.2.3 卵巢癌干细胞的诱导 |
| 2.2.4 卵巢癌干细胞的培养与传代 |
| 2.2.5 细胞中总RNA的提取 |
| 2.2.6 mRNA逆转录 |
| 2.2.7 PCR扩增反应 |
| 2.2.8 RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.2.9 质粒扩增实验 |
| 2.2.10 质粒的提取 |
| 2.2.11 细胞转染实验 |
| 2.2.12 western blot |
| 2.2.13 western blot试剂的配制 |
| 3 结果 |
| 3.1 c-Myc和 Notch1 基因在卵巢癌干细胞中高表达 |
| 3.2 c-Myc和 Notch1 蛋白的表达量与SNORD89 的表达存在相关性 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）CircNRIP1靶向抑制miR-629-3p调控PTP4A1影响宫颈癌细胞的生物学行为的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 :环状RNA在宫颈癌细胞系及组织中的差异表达 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要材料与仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 研究对象和分组 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 组织RNA提取 |
| 2.3.2 紫外吸收法检测RNA浓度和纯度 |
| 2.3.3 RNA反转录反应 |
| 2.3.4 QRT-PCR |
| 2.3.5 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 芯片样本RNA质检结果 |
| 3.2 CircRNA芯片检测结果分析 |
| 3.2.1 CircRNA分层聚类图(Heatmap) |
| 3.2.2 CircRNA散点图(Scatter Plot) |
| 3.2.3 差异表达的circ RNAs及芯片结果的验证 |
| 3.3 CircNRIP1 在宫颈癌组织及癌旁组织中的表达情况 |
| 3.4 CircNRIP1 表达情况与宫颈癌患者临床病理参数的关系 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :CIRCNRIP1 对宫颈癌细胞生物学行为的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料及方法 |
| 2.1 主要材料与仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 研究对象 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 构建慢病毒稳转细胞系 |
| 2.2.3 细胞总RNA提取 |
| 2.2.4 紫外吸收法检测RNA浓度和纯度 |
| 2.2.5 RNA反转录反应 |
| 2.2.6 QRT-PCR |
| 2.2.7 CCK-8实验 |
| 2.2.8 EDU增殖实验 |
| 2.2.9 细胞划痕实验 |
| 2.2.10 Transwell Matrigel实验 |
| 2.2.11 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 CircNRIP1 慢病毒稳转细胞株的构建与鉴定 |
| 3.2 CircNRIP1 对宫颈癌细胞增殖能力的影响 |
| 3.3 CircNRIP1 对宫颈癌细胞迁移能力的影响 |
| 3.4 CircNRIP1 对宫颈癌细胞侵袭能力的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 :CIRCNRIP1 通过调控MIR-629-3P/PTP4A1 轴影响宫颈癌细胞生物学行为的机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料及方法 |
| 2.1 主要材料与仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 研究对象 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 细胞RNA提取 |
| 2.2.3 RNA反转录反应 |
| 2.2.4 QRT-PCR |
| 2.2.5 CCK-8实验 |
| 2.2.6 EdU增殖实验 |
| 2.2.7 细胞划痕实验 |
| 2.2.8 Transwell Matrigel实验 |
| 2.2.9 双荧光素酶报告基因实验 |
| 2.2.10 细胞转染 |
| 2.2.11 Western Blot实验 |
| 2.2.12 裸鼠荷瘤模型构建 |
| 2.2.13 免疫组化实验 |
| 3 结果 |
| 3.1 CircNRIP1 负性调控miR-629-3p |
| 3.1.1 CircNRIP1 在细胞内的定位 |
| 3.1.2 CircNRIP1 负性调控miR-629-3p |
| 3.2 MiR-629-3p对宫颈癌细胞生物学行为的影响及其作用机制 |
| 3.2.1 MiR-629-3p在宫颈癌组织及癌旁组织中的表达 |
| 3.2.2 MiR-629-3p对宫颈癌细胞生物学行为的影响 |
| 3.2.3 MiR-629-3p影响宫颈癌细胞生物学行为的机制研究 |
| 3.3 Circ NRIP1 通过调控miR-629-3p/PTP4A1 轴影响宫颈癌细胞恶性生物学行为 |
| 3.3.1 MiR-629-3p可以恢复circNRIP1 对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响 |
| 3.3.2 CircNRIP1 调控miR-629-3p影响宫颈癌细胞恶性生物学行为机制的研究 |
| 3.3.3 CircNRIP1 对裸鼠荷瘤模型中宫颈癌细胞生物学行为影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）SAA、CA125、HE4联合检测对卵巢肿瘤诊断价值的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| (一)前言 |
| (二)资料与方法 |
| 1. 研究对象、入选及排除标准 |
| 2. 实验方法 |
| 3.阳性判断标准及评价指标 |
| 4. 统计学处理 |
| (三)结果 |
| 1. 血清SAA、CA125、HE4 表达情况比较 |
| 2. 血清SAA、CA125、HE4 在卵巢恶性肿瘤组不同手术病理分期患者中的表达情况 |
| 3. 血清SAA、CA125、HE4 单项及联合检测对卵巢肿瘤的诊断效能比较 |
| (四)讨论 |
| (五)结论 |
| (六)参考文献 |
| 综述 SAA、CA125、HE4 与肿瘤相关研究进展毕峥综述 贾琳钰校审 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）差异表达的TFF3通过激活PI3K/AKT通路参与宫颈腺癌的发病机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1.1 仪器、试剂和耗材 |
| 1.2 宫颈癌细胞系的培养及处理因素分组 |
| 1.3 临床组织标本的选择 |
| 1.4 实时荧光定量PCR |
| 1.5 免疫组化检测组织中TFF3 表达 |
| 1.6 CCK8-实验检测细胞增殖能力 |
| 1.7 Transwell实验检测细胞迁移能力 |
| 1.8 Western blot实验 |
| 1.9 流式细胞计数 |
| 1.10 统计学处理 |
| 结果 |
| 2.1 宫颈腺癌与宫颈鳞癌中TFF3 mRNA的表达差异 |
| 2.2 宫颈腺癌与宫颈鳞癌组织中TFF3的表达差异 |
| 2.3 TFF3 基因的生物信息学分析 |
| 2.4 TFF3 细胞因子对Hela细胞增殖和迁移能力的影响 |
| 2.5 TFF3 通过激活PI3K/AKT信号通路对Twist1 蛋白表达的活化 |
| 2.6 TFF3 细胞因子和LY294002 共同作用对Hela细胞增殖和迁移能力的影响… |
| 2.7 TFF3 细胞因子和LY294002 共同作用对Hela细胞凋亡的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述的参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（10）长链非编码RNA C5orf66-AS1在宫颈癌发生中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第一部分 长链非编码RNA C5orf66-AS1 在宫颈癌中的异常表达的筛选和验证 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 .组织标本 |
| 2.2 细胞复苏、传代和培养 |
| 2.3 主要试剂 |
| 2.4 主要仪器 |
| 2.5 qRT-PCR |
| 2.6 In situ hybridization(ISH) |
| 2.7 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 C5orf66-AS1 在宫颈癌组织中高表达 |
| 3.2 C5orf66-AS1 在宫颈癌细胞中高表达 |
| 3.3 C5orf66-AS1 与宫颈癌患者的预后相关性 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 长链非编码RNA C5orf66-AS1 在宫颈癌中的生物学功能 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 qRT-PCR |
| 2.5 质粒的构建和提取 |
| 2.6 Cell counting kit-8(CCK-8) |
| 2.7 克隆形成实验 |
| 2.8 细胞周期 |
| 2.9 细胞凋亡 |
| 2.10 划痕实验 |
| 2.11 Transwell实验 |
| 2.12 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 构建上调或下调C5orf66-AS1 表达的宫颈癌细胞株 |
| 3.2 C5orf66-AS1 能促进宫颈癌细胞株的增殖能力 |
| 3.3 C5orf66-AS1 能调控宫颈癌的细胞周期 |
| 3.4 下调C5orf66-AS1 能促进宫颈癌细胞的凋亡 |
| 3.5 C5orf66-AS1 对宫颈癌细胞的侵袭转移无影响 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 长链非编码RNA C5orf66-AS1 调控宫颈癌细胞增殖能力的分子机制 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 .细胞培养 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 试剂的配置 |
| 2.5 qRT-PCR |
| 2.6 蛋白质免疫印迹(western blot) |
| 2.7 RNA免疫共沉淀(RIP) |
| 2.8 荧光素酶报告实验 |
| 2.9 免疫组化(IHC) |
| 2.10 核质分离 |
| 2.11 CCK-8 |
| 2.12 动物实验 |
| 2.13 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 LncRNA C5orf66-AS1在宫颈癌细胞核和细胞质中的分布 |
| 3.2 C5orf66-AS1 调控miRNA的筛选 |
| 3.3 C5orf66-AS1 调控miR-637的验证 |
| 3.4 MiR-637在宫颈癌中的表达 |
| 3.5 MiR-637的靶基因筛选 |
| 3.6 MiR-637的靶基因验证 |
| 3.7 C5orf66-AS1 可调控RING1 的表达 |
| 3.8 C5orf66-AS1 通过竞争性结合miR-637调控RING1的表达,最终影响宫颈癌细胞的增殖能力 |
| 3.9 在实验动物中下调lncRNA C5orf66-AS1可抑制肿瘤的生长 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 全文总结 |
| 4.1 主要创新点 |
| 4.2 主要结论 |
| 4.3 研究展望 |
| 第五部分 长链非编码RNA(lncRNA)在宫颈癌中的研究现状 |
| 非编码RNA的生物发生和功能 |
| 宫颈癌中循环lncRNAs下调 |
| LncRNA-HOTAIR |
| LncRNA-H19 |
| LncRNA-XIST |
| LncRNA-CCHE1 |
| LncRNA-EBIC |
| LncRNA-MALAT1 |
| LncRNA-ANRIL |
| LncRNA-LET |
| LncRNA-NEAT1 |
| LncRNA-BLACAT1 |
| LncRNA-UFC1 |
| LncRNA-SNHG16 |
| LncRNA-SNHG20 |
| 结论和展望 |
| 参考文献 |
| 综述一 长链非编码RNA在妇科肿瘤中的调控表达 |
| 参考文献 |
| 综述二 妇科肿瘤中的 miRNA:具有重大影响的小分子 |
| 参考文献 |
| 综述三 趋化因子受体对卵巢癌患者免疫功能的影响 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 攻读博士期间参与的课题研究 |
| 中英文缩略词表 |
| 致谢 |
四、基因芯片在妇科肿瘤中的应用（论文参考文献）
- [1]基于生物信息学对子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌发病相关基因的初步研究[D]. 江海瀚. 广州医科大学, 2021(02)
- [2]KIF15对卵巢癌增殖和凋亡的影响及相关调控网络的生物信息学分析[D]. 孙欣慰. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020(07)
- [3]miR-152、miR-182在子宫内膜组织中的表达及临床意义[D]. 陈世超. 河北大学, 2020(02)
- [4]探讨影响宫颈癌患者的预后因素及其机制[D]. 闫文星. 吉林大学, 2020(08)
- [5]基于芯片的儿童卵巢未成熟畸胎瘤的microRNA表达谱初步研究及分子标记物筛选[D]. 熊婧. 上海交通大学, 2020(01)
- [6]核仁小RNA-SNORD89调控卵巢癌细胞干性的作用及其机制研究[D]. 朱文静. 中国医科大学, 2020(01)
- [7]CircNRIP1靶向抑制miR-629-3p调控PTP4A1影响宫颈癌细胞的生物学行为的机制研究[D]. 李馨慧. 中国医科大学, 2020(01)
- [8]SAA、CA125、HE4联合检测对卵巢肿瘤诊断价值的研究[D]. 毕峥. 大连医科大学, 2020(03)
- [9]差异表达的TFF3通过激活PI3K/AKT通路参与宫颈腺癌的发病机制[D]. 徐昕. 青岛大学, 2019(02)
- [10]长链非编码RNA C5orf66-AS1在宫颈癌发生中的作用及其机制研究[D]. 芮小慧. 苏州大学, 2019(06)