地衣芽孢杆菌β-1，3-1，4葡聚糖酶基因的克隆及其在乳酸乳球菌中的表达研究

论文摘要

β-葡聚糖酶的消化作用可促使饲料中β-葡聚糖的降解,从而在一定程度上消除其抗营养作用,提高饲料中营养成分的利用率。β-葡聚糖酶作为添加剂和对青贮饲料处理的研究及应用发展很快,范围也越来越广。经过大量实际应用,已普遍为饲料界所接受。目前在饲料工业中使用的酶制剂基本上是由大肠杆菌等微生物发酵产生的,发酵结束后需要将含酶发酵液经过一系列后处理操作,分离,加工成干物质才能应用于饲料生产中。这样工序繁杂,费时费力。若将β-葡聚糖酶在一个食品级宿主菌例如乳酸菌中进行表达,则不需进行酶制剂的发酵生产、分离和添加过程即可直接加入饲料中。本实验首先利用PCR方法从地衣芽孢杆菌中克隆到β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因并测序,将该基因序列与其他地衣芽孢杆菌β-葡聚糖酶进行blast比对,分析其相互间的同源性。再将该基因与大肠杆菌表达载体pET32a进行连接,转化大肠杆菌βL21,得到了有效的表达。确定β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因产物具有生物活性后,构建乳酸乳球菌表达载体pMG-glu,并电击转化乳酸乳球菌MG1363,最终得到有效表达的转化子。这为制备优良的青贮饲料专用乳酸菌剂奠定基础。

论文目录

摘要

Abstract

前言

英汉缩写词表

第一章文献综述

第一节 β-葡聚糖酶及其应用

第二节 β-葡聚糖酶的研究进展

第三节本研究的目的和意义

第二章 β- 葡聚糖酶基因同源序列的探索

第一节实验材料

第二节实验方法

第三节结果与分析

第三章 β- 葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达

第一节实验方法

第二节结果与分析

第四章 β- 葡聚糖酶基因在乳酸乳球菌中的表达

第一节实验方法

第二节结果与分析

第五章讨论

1 影响基因克隆的因素

2 影响大肠杆菌转化效率的因素

3 SDS-PAGE蛋白电泳

4 大肠杆菌BL21/pET-glu产酶能力研究

5 关于测序结果的讨论

6 电击转化乳酸乳球菌效率的影响因素

参考文献

附录

致谢

作者简介

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