Twist基因在膀胱癌中表达与RNA干扰的实验研究

论文摘要

膀胱肿瘤是泌尿外科最常见的恶性肿瘤,其临床特点主要是高发病率、高复发率和低度恶性。细胞凋亡是机体重要的生理过程,也是机体维持细胞群体数量稳定的重要机制。肿瘤是一类细胞周期失控性疾病,细胞凋亡和增殖失去平衡是肿瘤产生和发展的主要原因之一,也是肿瘤细胞的基本特征。Twist是一个在进化过程中高度保守的转录因子,Twist蛋白被认为是一种癌蛋白,能影响许多肿瘤细胞的凋亡、侵袭和转移。RNA干扰是一项新兴的高效、特异、安全、可操作性强的基因阻断技术。它的发现改变了人们对细胞基因调控的传统理解,RNA干扰技术在对基因功能研究、信号转导基因上下游关系确认以及抗病毒、抗肿瘤治疗中有着广阔的应用前景。本研究应用免疫组化法探讨了Twist在膀胱癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系,成功构建了靶向Twist基因的shRNA质粒表达载体,并筛选出其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体。用RNAi技术沉默膀胱癌T24细胞Twist基因的表达,观察其对人膀胱癌细胞生物学行为的影响。实验结果提示Twist在人膀胱癌组织中高表达,并与肿瘤的病理分级、临床分期有显著相关性。Twist是一个膀胱癌临床辅助诊断的分子标志物,并极可能是膀胱癌的一个潜在的治疗靶点,具有广阔的临床应用价值。人膀胱癌细胞系T24中Twist高表达,可以用作Twist基因沉默研究的靶细胞。RNAi沉默Twist基因后,明显地改变了人膀胱癌细胞生物学行为,表现细胞增殖能力降低,细胞凋亡的增加,细胞迁移速度明显减低。Twist基因干扰还可以明显提高膀胱癌T24细胞对化疗药物的敏感性,这将有助于减少化疗药物的毒副作用,增加化疗药物的疗效,对减少膀胱癌的复发起到重要作用。本研究提示:针对Twist基因及其表达产物的检测,将有助于判断膀胱癌的恶性程度,指导膀胱癌治疗;RNAi技术可以做为沉默膀胱癌中Twist基因的有效方法;而靶向Twist的基因治疗,可能为膀胱癌的治疗提供新的策略。

论文目录

• 提要
• 英文缩略词表
• 前言
• 第1篇 文献综述
• 第1章 Twist 基因在肿瘤形成中的意义
• 1.1 Twist 的发现及结构
• 1.2 Twist 与细胞凋亡
• 1.3 Twist 与肿瘤的发生
• 1.4 Twist 与肿瘤的转移
• 1.5 Twist 与肿瘤血管生成
• 第2章 基因干扰技术在膀胱癌中的意义
• 2.1 RNAi 的发现
• 2.2 RNAi 作用机制
• 2.3 RNAi 的特性
• 2.4 siRNA 制备方法
• 2.5 siRNA 的转染
• 2.6 小片段发夹RNA 的研究
• 2.7 RNAi 的应用及前景
• 第2篇 实验研究
• 第1章 Twist 在人膀胱癌组织及膀胱癌细胞中的表达
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 1.5 小结
• 1.6 附图
• 第2章 Twist-siRNA 表达载体的构建及鉴定
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 2.6 附图
• 第3章 RNAi 沉默Twist 基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 3.6 附图
• 结论
• 本研究创新点及意义
• 参考文献
• 攻读期间发表论文及参与课题情况
• 致谢
• 中文摘要
• Abstract