LEAFY基因转化苹果实生苗及其成花特异蛋白的分离的研究

论文摘要

本研究以苹果实生苗为试材,建立了其叶片不定芽的高效再生体系,并采用农杆菌介导法将LEAFY基因转入苹果杂交种中,以期获得含有LEAFY基因的苹果新种质,为苹果成花机理的研究打下基础。研究结果如下:1.研究了激素种类、浓度、暗处理时间以及叶片放置方式对苹果实生苗继代和叶片不定芽再生的影响,结果表明:70%乙醇处理10s+0.1%HgCl2溶液处理5min是苹果种子和茎段的最佳消毒方法,继代培养基MS+NAA0.1mg/L+BA0.5mg/L,生根培养基1/2MS+IBA1.0mg/L+7-14d暗处理,再生培养基MS+NAA0.4mg/L+TDZ2.0mg/L+21d叶片暗处理,并且叶片远轴面接触培养基。叶片不定芽再生率达到100%2.应用农杆菌介导法,以苹果实生苗组培苗的叶片为受体材料,进行了不同选择压、农杆菌侵染时间、共培养时间、抑菌素浓度等遗传转化影响因素的研究,建立了苹果杂交种遗传转化体系为:在农杆菌菌液中添加150mg/LAS,叶片经农杆菌浸染5min后。在苹果杂交种再生培养基上暗培养2d、然后加入cef300mg/L和km15mg/L进入光照培养,能获得最佳的GUS基因瞬时表达率为41.4%。3.利用GUS组织化学染色、PCR和RT-PCR扩增的方法对苹果杂交种的km抗性植株进行了初步检测,结果表明表明,LEAFY基因已经整合进2个株系的基因组中,并且能够正常表达,转导率0.5%4.利用双向凝胶电泳分离转基因和对照植株的蛋白质,经PDQuest软件分析,转基因植株和对照植株的蛋白质图谱对比,有207个蛋白点相匹配,匹配率92%。转基因植株中出现差异蛋白点12个,其中新出现特异蛋白点4个,有6个蛋白点表达量上调,减少蛋白点2个。

论文目录

• 目录
• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词
• 引言
• 第一章 文献综述
• 1 苹果遗传转化研究进展
• 1.1 影响苹果叶片离体再生的因素
• 1.2 影响苹果农杆菌介导遗传转化的因素
• 2 成花基因研究进展
• 2.1 分生组织特异性基因
• 2.2 调控花器官形成的基因
• 2.3 定域基因
• 2.4 成花计时基因
• 3 蛋白质组学研究进展
• 3.1 蛋白质组学的背景及其概念
• 3.2 蛋白质组学的研究内容
• 3.4 蛋白质组学在果树上的应用
• 第二章 苹果实生苗叶片不定芽再生体系的建立
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 赤霉素对打破种子休眠的影响
• 2.2 不同消毒方法对种子的处理效果
• 2.3 不同激素对继代培养的影响
• 2.4 激素对苹果叶片愈伤组织形成和不定芽再生的影响
• 2.5 暗培养时间对苹果实生组培苗外植体再生的影响
• 2.6 叶片放置方式对再生的影响
• 2.7 不同条件对生根的影响
• 3 讨论
• 3.1 影响打破苹果杂交种子休眠的因素
• 3.2 影响外植体消毒的因素
• 3.3 影响苹果实生苗离体繁殖体系建立的因素
• 3.4 影响苹果实生苗再生体系建立的因素
• 第三章 苹果杂交实生组培苗遗传转化体系的建立
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 浸染时间对叶片遗传转化的影响
• 2.2 卡那霉素选择压的确定
• 2.3 共培养时间对转化的影响
• 2.4 乙酰丁香酮对遗传转化效率的影响
• 3 讨论
• 3.1 选择压对遗传转化的影响
• 3.2 浸染时间和共培养时间对转化的影响
• 3.3 乙酰丁香酮对遗传转化的影响
• 3.4 抗生素对遗传转化的影响
• 第四章 转LEAFY基因苹果实生苗植株的检测
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 转LEAFY基因苹果实生苗的GUS组织化学染色检测
• 2.2 PCR检测结果
• 2.3 RT-PCR检测结果
• 3 讨论
• 第五章 转LEAFY基因苹果成花特异蛋白的分离
• 1 材料与方法
• 1.1 供试材料
• 1.2 试剂和设备
• 1.3 研究方法
• 2 结果与分析
• 3 结论
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 硕士在读期间发表论文