广东茶树种质资源遗传多样性的SRAP研究

论文摘要

利用传统的形态和农艺性状相结合考察茶树的遗传变异和进化关系比较困难,而分子标记则是研究茶树遗传多样性和遗传分化的有效工具。本研究首次采用SRAP标记对25份广东茶树地方种质资源和5份对照品种的遗传多样性进行了系统评价和分类研究,主要研究结论如下:本研究首先建立了茶树SRAP标记反应体系,结果表明茶树SRAP-PCR最佳反应体系:Mg2+3.0mmol/mL;Taq酶2.0U;dNTPs 0.2mmol/L;引物2.0μmol/L;10×Buffer2.0μL;模板DNA 20ng;反应总体积为25μL。用优化的体系对30份茶树样本进行了扩增分析,所用引物都能扩增出清晰的谱带,且多态性很强。采用SRAP标记对茶树种质的遗传多样性进行分析,结果表明SRAP标记是一种有效、经济和可靠的分子标记技术。利用21对SRAP引物对30份茶树种质基因组DNA的分析,共扩增出127条带,其中114条为多态性带,比例为88.67%。每对引物组合的谱带数和多态性带数分别为6.05个和5.43个。在遗传距离0.3880处,30份茶树种质分为A、B、C三类,其中83.33%归到A类中。在遗传距离0.3140处,又可将A群划分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三个亚群。其中第1亚群包括13个品种,第Ⅱ亚群包括2个品种,第Ⅲ亚群包括10个品种。以上研究,从分子水平上揭示了广东茶树种质的遗传多样性,为广东茶树种质资源保存以及优良品种的选育积累了数据,对广东茶树地方品种保护和利用具有重要意义。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 分子标记及其应用
• 1.1.1 RFLP标记
• 1.1.2 RAPD标记
• 1.1.3 SSR标记
• 1.1.4 ISSR标记
• 1.1.5 AFLP标记
• 1.1.6 TRAP标记
• 1.1.7 EST-SSR标记
• 1.1.8 SRAP标记
• 1.1.9 SRAP与其它分子标记的比较
• 1.2 茶树分子水平研究
• 1.2.1 遗传多样性和遗传演化研究
• 1.2.2 种质鉴定的研究
• 1.2.3 遗传稳定性分析
• 1.2.4 分子遗传图谱的构建
• 1.3 研究目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 供试材料的采集与处理
• 2.1.2 主要仪器与试剂
• 2.1.3 SRAP引物
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 试验的技术路线
• 2.2.2 茶树DNA提取及检测
• 2.2.3 茶树SRAP-PCR扩增程序
• 2.2.4 茶树SRAP-PCR反应体系的优化
• 2.2.5 SRAP扩增产物的电泳检测
• 2.3 SRAP随机引物的筛选
• 2.4 遗传多样性的SRAP分析
• 3 结果与分析
• 3.1 DNA模板纯度分析
• 3.2 茶树SRAP-PCR反应体系的建立与优化
• 3.2.1 不同模板DNA浓度对SRAP扩增效果的影响
• 3.2.2 不同引物浓度对SRAP扩增效果的影响
• 3.2.3 不同dNTPs浓度对SRAP扩增效果的影响
• 2+浓度对SRAP扩增效果的影响'>3.2.4 不同Mg²⁺浓度对SRAP扩增效果的影响
• 3.2.5 不同Taq酶用量对SRAP扩增效果的影响
• 3.2.6 不同退火温度对SRAP扩增效果的影响
• 3.2.7 茶树SRAP-PCR反应体系的确定
• 3.3 广东茶树种质资源的SRAP分析
• 3.3.1 SRAP标记的多态性
• 3.3.2 SRAP聚类及遗传距离分析
• 4 讨论
• 4.1 关于SRAP-PCR反应体系的影响因子
• 4.2 关于SRAP标记的应用
• 4.3 广东茶树种质资源遗传多样性的利用和保护
• 小结与展望
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历
• 术语与略语表
• 部分材料照片