葛根素微乳的制备及生物利用度的研究

论文摘要

葛根素（Puerarin）为豆科葛属植物葛根异黄酮的主要有效成分之一,临床疗效确切。因其在水中溶解度较低,口服生物利用度仅为3.779%;临床上主要将其溶解于1,2—丙二醇中制备注射剂,然而关于葛根素注射液临床应用不良反应的报道较多,因此研究高生物利用度口服葛根素微乳制剂具有重要意义。本课题以微乳为药物载体制备高载药量葛根素口服给药系统,通过前期组份筛选、相图制备确定微乳处方,以市售片剂为对照考察微乳中药物在不同介质中的溶出特征,采用Caco-2细胞模型考察微乳体系中药物转运特性,动物体内考察葛根素微乳药物动力学特征并对制剂体内外相关性进行初步研究。处方前研究中,建立了葛根素在甲醇—水,人工胃液、人工肠液和30%乙醇环境中的HPLC-UV含量测定方法并对方法进行系统评价,结果表明分析方法准确、灵敏、快速,符合测试要求。测定葛根素在不同表面活性剂、助表面活性剂和油相、水相中的溶解度,葛根素在油相中基本不溶;在不同pH水相中微溶,随pH上升溶解度增大;在Brij-96v中溶解度较大。对葛根素12h内在人工胃液和人工肠液中的稳定性进行考察,在考察时间范围内（12h）,药物稳定性良好。通过溶解度实验、处方配伍实验和伪三元相图的绘制,以乳化时间、色泽和粒径的大小为指标,筛选油相、表面活性剂、助表面活性剂的最佳搭配和处方配比。微乳的最佳处方确定为IPM（10%）,Brij-96V（32.5%）,Ethanol（32.5%）,Water（25%）。葛根素在微乳中的溶解度最高可达77mg/ml,PUE-ME的粒径为（16.46±2.95）nm,自微乳化时间＜1 min。以市售片剂为对照,进行了葛根素的体外药物释放试验。在pH 1.2和pH 6.8两种介质中,葛根素微乳的体外释药速度和程度明显大于市售片剂,12h累积释药量达90%。同一处方在模拟肠液中的释药速度比在模拟胃液中稍快。在葛根素微乳体外释药机制的考察实验中,葛根素微乳在两种介质中的释药机制分别符合一级动力学和Ritger-peppas动力学方程。Caco-2细胞模型的建立是通过细胞接种于Millicell插入式培养皿中,培养21天后,测定碱性磷酸酶活性、跨膜电阻、荧光素钠透过量以检验细胞的极化现象和致密程度验证细胞模型特性。以Caco-2细胞模型进行葛根素微乳制剂中药物的细胞摄取、跨膜转运的研究,结果表明微乳和微乳稀释液中葛根素的吸收、分泌和摄取均较对照组显著增加;P糖蛋白抑制剂—环孢菌素可抑制对照液和微乳液中葛根素在Caco-2细胞的分泌而对转运影响较小。大鼠血浆中葛根素的测定采用UltimateXB-C18柱（250*4.6,5μm）,柱温:40℃,流动相:甲醇-水为22:78,检测波长:250nm,采用蛋白沉淀法处理血浆,在40～2000ng/ml的范围内线性关系良好（r2=0.9986）。定量下限为40ng/ml,回收率和精密度符合生物样品的测定要求。方法可用于大鼠血浆中葛根素的含量测定和药动学研究。SD大鼠分别以30mg/kg的剂量灌胃给予葛根素微乳,以葛根素原料药配制混悬液为对照,3P87软件计算药动学参数。微乳组口服给药后大鼠体内血药浓度和曲线下面积均显著增加,微乳组AUC是对照组的7.99±1.99倍,Cmax约是对照组的7倍,Tmax稍有推后。以Cmax/AUC评价药物的吸收速度,结果为微乳＞原料药。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写词表
• 前言
• 一、葛根素研究概述
• 二、微乳给药系统
• 三、Caco-2细胞模型及其基本特点
• 四、本文的研究目的及研究内容
• 参考文献
• 第一章 葛根素处方前的研究
• 1.材料与仪器
• 2 实验方法
• 2.1 葛根素HPLC分析方法的建立与确证
• 2.2 葛根素在均一溶剂中溶解度的测定
• 2.3 葛根素的稳定性
• 3.实验结果
• 3.1 葛根素分析方法的建立
• 3.2 葛根素饱和溶解度的测定
• 3.3 稳定性实验结果
• 4.讨论
• 本章研究小结
• 第二章 葛根素微乳的制备
• 1 材料与仪器
• 2 实验方法
• 2.1 不同油相和乳化剂的配伍选择
• 2.2 助乳化剂的选择
• 2.3 乳化剂与助乳化剂比例的选择
• 2.4 微乳相图的绘制
• 2.5 各微乳处方对葛根素增溶作用的研究
• 3 实验结果
• 3.1 不同乳化剂和油相配伍力
• 3.2 助表面活性剂对微乳形成的影响
• 3.3 乳化剂与助乳化剂比例的选择
• 3.4 相图制备
• 3.5 葛根素在各微乳处方中的溶解度
• 4 讨论
• 本章小结
• 第三章 葛根素微乳的体外性质的考察
• 1 仪器与材料
• 2 方法
• 2.1 微乳处方稳定性的考察
• 2.2 形态观察
• 2.3 粒径及分布
• 2.4 粒径影响因素的考察
• 2.5 体外释放度试验
• 2.6 药物释放机制的考察
• 3 实验结果
• 3.1 稳定性实验结果
• 3.2 形态学和粒径
• 3.3 处方粒径的考察
• 3.4 粒径影响因素的考察
• 3.5 体外释放度试验
• 3.6 药物释放机制的考察
• 4 讨论
• 本章小结
• 第四章 Caco-2细胞模型的建立与葛根素微乳细胞吸收特性研究
• 1 材料与仪器
• 2 实验方法
• 2.1 Caco-2细胞模型的建立
• 2.2 Caco-2细胞模型的验证
• 2.3 供试液的制备
• 2.4 葛根素微乳在Caco-2细胞模型中的吸收与摄取
• 2.5 数据分析
• 3 结果
• 3.1 Caco-2细胞模型的验证
• 3.2 葛根素微乳在Caco-2细胞上的转运
• 3.3 葛根素微乳中Caco-2细胞对药物的摄取
• 4 讨论
• 本章小结
• 第五章 葛根素微乳给药系统的体内药动学研究
• 1 材料与仪器
• 2 实验方法
• 2.1 葛根素血浆样品高效液相色谱分析方法的建立
• 2.2 葛根素制剂制备方法
• 2.3 给药方法与样品采集
• 2.4 数据分析
• 2.5 体内外相关性的研究
• 3 实验结果
• 3.1 葛根素体内血浆样品分析方法的确证
• 3.2 葛根素口服给药后大鼠体内药动学
• 3.3 各制剂组相关数据比较
• 4 体内外相关性的研究
• 5 讨论
• 本章小结
• 参考文献
• 全文总结
• 1 处方前考察
• 2 微乳相图的绘制
• 3 葛根素微乳的体外评价
• 4 Caco-2细胞模型的建立和葛根素微乳的转运和分泌
• 5 大鼠体内药物动力学的研究
• 葛根素微乳综述
• 天然药用植物红景天药用成分及药剂学研究进展
• 葛根素微乳的制备
• 致谢