干细胞因子对糖尿病小鼠结肠Cajal间质细胞的影响

干细胞因子对糖尿病小鼠结肠Cajal间质细胞的影响

论文摘要

糖尿病(diabetes mellitus,DM)患者中,胃肠动力障碍的发病率为25%-76%,包括胃轻瘫、便秘与腹泻等,影响患者的生活质量与血糖控制,机制尚不完全清楚。Cajal间质细胞(interstitial cells ofCajal,ICC)是胃肠运动的起搏细胞,且介导神经递质的产生和作用。研究发现,DM胃肠动力障碍与胃肠道ICC的异常改变有关;干细胞因子(stem cell factor,SCF)是ICC特异性标志物c-Kit(酪氨酸激酶受体)的天然配基,SCF/Kit信号对ICC的表型维持、增殖分化等有重要作用,而SCF-Kit信号对ICC胚胎期或成熟后发育的重要性尚存在分歧。本研究将探讨SCF与DM小鼠结肠ICC异常改变的关系,为寻找该病新的治疗方法提供理论依据。【目的】1.探讨DM小鼠结肠SCF及ICC的变化关系。2.探讨SCF对小鼠结肠ICC的影响。3.观察外源性SCF对DM小鼠结肠ICC病变的作用。【方法】1.建立DM小鼠模型、分组及干预:♂C57/BL6小鼠SPF环境饲养,予一次性腹腔注射链脲佐菌素(150mg/kg)建立DM小鼠模型,DM鼠成模后分为:①正常对照组(N,n=10),②DM组(DM,n=10),以上2组均予磷酸盐缓冲液(PH=7.4),隔日腹腔注射×6周;③正常+anti-SCF组(N+anti-SCF,n=10):予anti-SCF(1mg/kg)隔日腹腔注射×6周;④DM+SCF组(DM+SCF,n=10):予SCF(0.2ug/kg)每日腹腔注射×6周。监测体重、血糖。干预结束并休息3天后,处死所有小鼠。2.留取所有小鼠近、远端结肠组织,Western-blot检测结肠组织中SCF蛋白的表达情况;留取所有小鼠血清,ELISA法检测血清中可溶型SCF浓度。3.用流式细胞仪检测组织中ICC的数量比例;透射电镜观察小鼠结肠组织中ICC的超微结构;免疫组化标记结肠组织c-Kit(ICC的特异性受体)阳性细胞;Western blot检测结肠组织c-Kit蛋白的表达。【结果】1.①体重:6周后,所有小鼠均存活。干预前各组小鼠体重无统计学差异(P>0.05);干预6w后,与N组比较,N+anti-SCF组无显著变化(P>0.05),DM组显著下降(P<0.05),DM+SCF组与DM组无统计学差异(P>0.05)。②血糖:干预前后,N组与N+anti-SCF组血糖均在正常范围内,DM组与DM+SCF组血糖均符合DM成模标准,且后两组间亦无统计学差异(P>0.05)。2.结肠SCF:干预6w后,Western blot结果显示:与N组比较,DM组近、远端结肠SCF蛋白表达显著减少(P<0.05),N+anti-SCF组亦显著减少(P<0.05),且与DM组无显著差异(P>0.05);DM+SCF组较DM组显著增加(P<0.05),且与N组无显著差异(P>0.05)。3.血清SCF:干预6w后,ELISA法结果显示:与N组比较,DM组血清SCF显著减少(P<0.05),N+anti-scF组亦显著减少(P<0.05),且与DM组无显著差异(P>0.05);DM+SCF组较DM组显著增加(P<0.05),且与N组无显著差异(P>0.05)。4.ICC数量及c-Kit蛋白变化:干预6w后,流式细胞仪结果显示:与N组比较,DM组近、远端结肠ICC的数量比例显著减少(P<0.05),N+anti-SCF组亦显著减少(P<0.05),且与DM组无显著差异(P>0.05);而DM+SCF组较DM组显著增加(P<0.05),且与N组无显著差异(P>0.05)。Western blot及免疫组化均显示:与N组比较,DM组近、远端结肠c-Kit蛋白表达显著减少(P<0.05),N+anti-SCF组也显著减少(P<0.05);DM+SCF组较DM组显著增加(P<0.05),仍低于N组(P<0.05)。5.ICC超微结构:干预6w后,透射电镜结果显示:N组小鼠近、远端结肠ICC核膜完整,胞浆丰富,胞质内富含线粒体等细胞器,且结构清晰、发育良好;ICC与ICC、与神经纤维以及SMC间形成紧密连接。DM小鼠近、远端结肠ICC出现基膜溶解,细胞器数量减少,内质网扩张,线粒体肿胀、空泡样变性等,并且ICC与周围细胞之间的连接结构也被破坏。N+anti-SCF组小鼠结肠ICC超微结构改变与DM组类似。DM+SCF组结肠ICC病变较DM小鼠有所改善。【结论】1.DM小鼠近、远端结肠ICC数量明显减少、超微结构破坏严重,可能是导致DM结肠动力障碍的病理基础。2.DM小鼠血清和近、远端结肠组织中SCF水平的下降,可能是DM小鼠结肠中ICC数量减少和超微结构破坏的原因。3.外源性SCF可能使DM相关的结肠ICC病变得到显著改善。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 前言
  • 参考文献
  • 第一部分 糖尿病小鼠模型的建立以及对干细胞因子的干预
  • 材料和方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第二部分 干预后小鼠干细胞因子的变化
  • 材料和方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第三部分 干预对小鼠结肠Cajal间质细胞的影响
  • 材料和方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 小结
  • 附录(图片)
  • 综述
  • 发表文章
  • 致谢
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