论文摘要
肾小球硬化和小管间质纤维化是各种慢性肾脏疾病进展至终末期肾衰竭的共同表现和主要病理基础。近年来,小管间质纤维化在慢性肾脏病进展中的作用日益显著。因此,探讨肾间质纤维化的防治措施在临床上具有重要意义。中医药在防治器官纤维化方面取得了良好的效果,并且显示出广阔的应用前景。本实验所采用的益气活血降浊方由黄芪、当归、川芎、白芍、柴胡、黄芩、大黄、茯苓、公英等中药组成,具有益气活血,升清利湿降浊的功效。为了初步探讨该方对肾间质纤维化的影响,结合中药多成分、多环节、多层次、多靶点的药理学作用特点,我们通过建立单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型,应用免疫组织化学法、实时荧光定量PCR等技术从组织、蛋白质、基因水平进行研究,旨在初步探讨益气活血降浊方防治RIF的可能作用机制。目的：通过建立UUO大鼠模型,从整体动物实验研究益气活血降浊方是否能够在一定程度上改善UUO大鼠肾功能,减轻肾脏病理损伤,进而从组织、蛋白质、基因水平探究该方对TGF-β1/Smads/BMP-7信号转导通路及其相关因子表达的影响,以期阐明该方防治RIF的可能作用机制。方法：采用单侧输尿管梗阻致大鼠肾间质纤维化模型。将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、蒙诺组和益气活血降浊方大、中、小剂量组,各组大鼠分别于造模后第7、14、21天处死,并检测以下指标。1.药效学：观察每组大鼠的一般状态和每周体重和肾重体重比变化；用考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白定量；每周取材完,分离大鼠血清,测定BUN、Scr、ALB的含量；肾组织进行HE、Mallory染色以观察肾脏病理形态学变化。2.免疫组化：检测各组大鼠TGF-β1、Smad6、BMP-7、CTGF、FN、I、Ⅲ型胶原蛋白表达情况。3.实时定量PCR：检测各组大鼠TGF-β1mRNA、BMP-7mRNA、CTGFmRNA的表达情况。结果：1.药效学：益气活血降浊方可以在一定程度上改善UUO大鼠的一般状态,但对体重的影响不明显。与正常组相比,模型组大鼠在各时间点肾重体重比显著增加（P<0.01）,24h尿蛋白定量显著上升（P<0.01）,血清Scr在造模后第2、3周显著升高（P<0.01）,ALB显著下降（P<0.01）,BUN基本无统计学差异；与模型组比较,造模后第1、2周,各治疗组大鼠肾重体重比均较之下降,但无统计学差异;第3周时,蒙诺组、中药中、大剂量组与模型组比较有显著性差异（P<0.05）。第1周各治疗组大鼠24h尿蛋白定量与模型组比较下降但无明显统计学差异；第2例中药大、小剂量组24h尿蛋白定量显著降低（P<0.05）,中剂量组有极显著降低（P<0.01）;第3周,各治疗组24h尿蛋白定量与模型组相比均有极显著下降（P<0.01）；中药中、大剂量组和西药组大鼠血清Scr、BUN、ALB水平在第3周有明显改善（P<0.01,P<0.05）。中药中、大剂量组大鼠在各时间点肾小球硬化指数和肾间质损伤检查评分均显著降低（P<0.01）。2.各组大鼠肾组织TGF-β1、Smad6、BMP-7、CTGF、FN、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达：模型组大鼠肾组织TGF-β1、CTGF、FN、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达在各时间点较正常组表达显著增高（P<0.01）,中药大、中、小剂量组与西药组较模型组表达显著减少（P<0.01）；Smad6、BMP-7蛋白表达情况与上述因子表达情况相反。3.各组大鼠肾组织TGF-β1mRNA、BMP-7mRNA、CTGFmRNA表达：与正常组相比,模型组大鼠肾组织在各时间点TGF-β1mRNA、CTGFmRNA表达显著上调（P<0.01）；中药中、大剂量组和西药组大鼠在各时间点表达有不同程度的下调（P<0.01,P<0.05）。BMP-7mRNA表达情况与TGF-β1mRNA、CTGFmRNA表达情况相反。结论：1.益气活血降浊方能在一定程度上改善UUO大鼠的一般状态,但对体重的影响不十分明显,降低大鼠肾重体重比,降低24h尿蛋白定量,改善Scr、BUN、ALB等生化指标水平。2.益气活血降浊方能减轻UUO大鼠肾脏病理学改变,如减轻肾小管上皮细胞脱落,空泡样变性,肾间质炎细胞浸润,肾小管扩张和肾小管基底膜结构不完整的程度.。3.益气活血降浊方能下调肾组织TGF-β1、FN、CTGF、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达水平,上调BMP-7、Smad6蛋白的表达。4.益气活血降浊方能下调肾组织TGF-β1mRNA、CTGFmRNA的基因表达水平,上调BMP-7mRNA的基因表达。总之,益气活血降浊方对UUO大鼠的肾脏具有一定保护作用,其机理可能在于通过TGF-β1/Smads/BMP-7信号通路进行调节：益气活血降浊方可以通过下调大鼠肾组织TGF-β1表达,上调Smad6、BMP-7的表达,进而抑制CTGF的高表达,阻止胶原等细胞外基质的合成,从而起到拮抗RIF的作用。
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- [1].十味芪黄益肾方对腺嘌呤所致肾纤维化大鼠模型TGF-β1/Smads/BMP-7信号通路的影响[J]. 西部医学 2019(08)