论文摘要
目的用携带骨形态发生蛋白-2（BMP-2）基因的慢病毒病毒载体转染SD大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）,接种于纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸（nHAC/PLA）材料构建组织工程骨,体外观察成骨表达情况。方法体外分离、培养SD大鼠骨髓基质干细胞,传代培养后分为A、B、C组。A组为BMP-2和eGFP转染组;B组为空慢病毒病毒载体转染组;C组为未转染组。取携带BMP-2和增强型绿色荧光蛋白（eGFP）的慢病毒（MOI=25pfu/cell）感染SD大鼠BMSCs。荧光显微镜下观察eGFP的表达,判断感染效率及细胞生长情况。通过噻唑篮（MTT）和流式细胞仪（FCM）检测转染后细胞生长增殖活力及对细胞周期的影响。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组化和酶联免疫吸附反应（ELISA）检测BMP-2蛋白的表达。转染成功后接种于nHAC/PLA支架,构建组织工程骨。碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒检测ALP活性,茜红素染色检了解成骨情况;扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长和合成分泌骨基质的情况。结果①经密度梯度离心法分离、贴壁筛选、培养所获的细胞,经鉴定是鼠的BMSCs,并且能大量增殖。②慢病毒感染后BMSCs形态特征、细胞增殖情况及细胞周期与未转染组相比无显著变化。③基因转染后48h,RT-PCR、免疫组化和ELIASA都能检测到BMP-2基因的转录及表达,而空载体转染组及未转染组未见其转录及表达,差异均有显著性意义（P<0.05）。④BMP-2转染的BMSCs具有成骨细胞的结构特征和生物学特性;转染后的BMSCs的ALP均较空转染组和未转染组有显著增高,差异均有显著性意义（P<0.05）。⑤BMP-2基因修饰的BMSCs在nHAC/PLA支架表面和孔隙内黏附、生长良好,仍可高水平表达BMP-2蛋白。结论①慢病毒携带BMP-2基因可有效感染SD大鼠BMSCs并使BMP-2获得稳定大量表达;②BMP-2基因转染后的BMSCs向成骨细胞方向分化加快,并具有具有典型成骨细胞的形态学特征和较强的生物学活性;③BMP-2基因修饰的BMSC在nHAC/PLA支架中黏附、生长良好,继续高水平表达并分泌BMP-2,组织工程骨构建获得初步成功;④nHAC/PLA是一种良好的骨组织工程的载体材料。