论文摘要
杨树无性系SN04-31与LH04-17是由华中农业大学杨树课题组自主选育的F1代优良株系,前者是72杨（Populus X euramericana’SanMartino’）×辽宁杨（Populus liaoningensis）的FI代株系,后者是69杨（Populus deltiodes’lux’）×63杨（Populus deltides’Harvord’）的F1代株系。SN04-31与LH04-17均具有树干通直、树形美观、速生、适应性强等优良杂种优势。本研究以杨树无性系SN04-31与LH04-17带芽茎段为外植体,建立了高效稳定的再生体系,并对LH04-17叶片不定芽诱导的影响因素进行了多次组合优化,筛选出叶片不定芽诱导的最佳培养基。在此基础上,对不定芽诱导筛选阶段及抗性芽生根阶段进行了抗生素敏感性试验,并对影响根癌农杆菌转化效率的主要影响因子进行了研究,建立了LH04-17高效的遗传转化系统。最后,将成功通过抗生素筛选的抗性芽,进一步借助分子手段对其进行检测,剔除假阳性,筛选出呈现阳性的植株。研究结果如下：1.SN04-31与LH04-17组培再生体系的建立最佳消毒方法：70%的酒精浸泡20S+0.1%升汞灭菌1.5min-2.5min;启动培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L,茎段不定芽的诱导率均为90%以上；杨树无性系SN04-31与LH04-17不定芽增殖培养的最佳培养基分别为MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.05mg/L和1/2MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.02mg/L:最适壮苗培养基为MS+6-BAO.1mg/l+NAA0.02mg/I;最适生根培养基为1/2MS+IBA （0.2mg/l）,生根率达96%,平均生根条数为11.2条：以上培养基均添加0.7%琼脂,3%蔗糖。2.LH04-17叶片不定芽的诱导诱导叶片不定芽分化的最适培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAAO.1mg/L+蔗糖3%+琼脂0.7%,pH5.8,不定芽分化率高达91%;组培苗顶端2-4片叶子分化率最高,叶片近叶柄端分化能力强于比叶尖端；生根苗叶片的分化率高于未生根苗。3.抗生素敏感性试验抗生素筛选结果：头孢霉素对农杆菌EHA105抑菌效果好,适宜浓度为200-250mg/L；叶片转化筛选培养阶段,卡那霉素适宜浓度为15-20mg/L;不定芽生根培养阶段,适宜浓度为10-12.5mg/L。4.LH04-17遗传转化体系的建立与优化试验结果表明：预培养2d,用OD600=0.4的菌液侵染8-12min,共培养2d,延迟筛选3d,在此转化体系下,其抗性芽获得率最高。5.LH04-17抗性芽的PCR分子检测将获得的5株抗性植株进行PCR检测,结果显示有1株扩增出的条带和质粒中的目的条带一致,其它4株没有扩增出任何条带,初步证明了已经将Cry1C+9C基因导入LH04-17基因组中。