论文摘要
目的 研究趋化因子巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammationprotein-1α,MIP-1α)促小鼠外周血中树突状细胞(Dendritic cells,DC)动员作用及其机制,并在此基础上进一步研究MIP-1α动员的DC在胃癌免疫治疗中的作用。 方法 (1)MIP-1α通过尾静脉注射C57BL/6J(B6)小鼠,分别在不同时间采集小鼠外周血。分离外周血单个核细胞(PBMNCs),用流式细胞仪分选出F4/80-B220-CD11c+细胞,比较外周血中F4/80-B220-CD11c+细胞数量的变化。采用不同剂量的MIP-1α注射小鼠,24小时后采集小鼠外周血,分析小鼠外周血中F4/80-B220-CD11c+细胞数量的差异。B6/WT、CCR1-/-、CCR5-/-小鼠分别静脉注射MIP-1α,24小时后采集外周血分选出F4/80-B220-CD11c+细胞,比较不同小鼠外周血中F4/80-B220-CD11c+细胞数量的差异。(2)通过细胞形态学、表型和混合淋巴细胞反应,检测新鲜分离的F4/80-B220-CD11c+细胞和经过细胞因子mGM-CSF、IL-4和mTNF-α培养后的F4/80-B220-CD11c+细胞。(3)反复冻融法制备胃癌可溶性抗原,将其与MIP-1α动员的DC共同培养,制备成DC疫苗以激活T细胞,检测活化的T细胞在体外对胃癌细胞的杀伤作用。 结果 (1)MIP-1α注射B6小鼠4小时后外周血中F4/80-B220-CD11c+细胞数量即升高,24小时后逐渐达到高峰,占PBMNCs13.31%±1.27%。当MIP-1α注射剂量为20μg/只时,小鼠外周血中F4/80-B220-CD11c+细胞数量达到最多,占PBMNCs13.29%±1.1%。在B6野生型小鼠外周血中F4/80-B220-CD11c+细胞最多,占PBMNCs13.47%±1.4%,而在CCR1-/-和CCR5-/-基因敲除小鼠分别为10.55%±0.79%和5.87%±0.48%,与B6野生型小鼠相比差异有显著性(P<0.01)。(2)新鲜分离的F4/80-B220-CD11c+细胞不具有成熟DC的特征,经过细胞因子体外培养的F4/80-B220-CD11c+细胞具有典型的DC形态和表型,在混合淋巴细胞反应中具有极强的刺激T细胞增殖的能力。(3)负载了胃癌抗原的MIP-1α动员的
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标签:树突状细胞论文; 巨噬细胞炎症蛋白论文; 趋化因子论文; 胃癌论文;