论文摘要
目的:通过构建黄体生成素受体（ Luteinizing Hormone/human Chorionic Gonadotropin receptor,LHR）真核表达质粒载体（pcDNA3.1（+）-LHR）,转染乳腺癌细胞,研究人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG）对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响。方法:用KpnⅠ/HpaⅠ双酶切LHR-cDNA质粒载体;KpnⅠ/EcoR V双酶切pcDNA3.1（+）载体,构建pcDNA3.1（+）-LHR质粒载体,稳定转染MCF-7乳腺癌细胞,建立稳定高表达LHR的乳腺癌细胞株。应用体外侵袭转移实验方法,观察hCG对乳腺癌细胞迁移能力的影响。在此基础上,以半定量RT-PCR,分析hCG对乳腺癌细胞MMP1、MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP3、VEGF等侵袭转移相关基因转录表达的影响。结果:1、构建pcDNA3.1（+）-LHR真核表达质粒载体,通过酶切图谱及测序等方法鉴定。2、pcDNA3.1（+）-LHR稳定转染MCF-7细胞,通过RT-PCR和细胞内cAMP浓度测定,证实转染LHR的MCF-7细胞高表达LHR。3、MTT法测定hCG对乳腺癌细胞增殖力影响,转染LHR的MCF-7细胞增殖力无明显改变。4、应用体外侵袭转移实验方法,测定hCG对乳腺癌细胞侵袭力影响,转染LHR的MCF-7细胞侵袭力明显降低。5、应用半定量RT-PCR方法,测定hCG对乳腺癌细胞侵袭转移相关基因表达的影响,转染LHR的MCF-7细胞MMP9、VEGF基因转录受抑制,而TIMP1转录水平升高。结论:1、hCG对MCF-7乳腺癌细胞增殖力无明显影响。2、hCG抑制转染LHR的MCF-7细胞侵袭转移能力。3、hCG抑制转染LHR的MCF-7细胞MMP9、VEGF基因表达;促进TIMP1基因表达。
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