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免疫球蛋白的制备及对小白鼠免疫功能的影响

2020-11-30阅读(721)

免疫球蛋白的制备及对小白鼠免疫功能的影响

论文摘要

以新鲜猪血浆为原料,采用饱和硫酸铵分步盐析法制备免疫球蛋白产品,并研究其对小白鼠免疫功能的影响。试验一:以IgG的含量为考查指标,比较辛酸法和饱和硫酸铵盐析法的沉淀效果。结果表明,饱和硫酸铵盐析法的沉淀效果优于辛酸法。试验二:以IgG的含量为考查指标,采用单因素试验和正交试验优化免疫球蛋白的提取条件。单因素试验结果表明:①提取温度为30℃时,IgG的含量最高,达81.75%。②静置时间为45min时,IgG的含量最高,达87.43%。③pH值为7.0时,IgG的含量最高,达81.47%。正交试验结果表明:最佳工艺参数为温度20℃,静置时间45min,pH值7.0,此条件下IgG的含量为88.08%。试验三:采用环磷酰胺（Cyclophosphamide,Cy）建立免疫抑制模型,研究自制IgG对小白鼠免疫功能的影响,旨在探讨自制的IgG能否增强小白鼠的免疫力。选用健康的SPF级昆明种小鼠100只,雌雄各半,体重18±2g,分为10个处理组,每组10只:①正常空白组;②齐墩果酸组;③低剂量IgG组;④中剂量IgG组;⑤高剂量IgG组;⑥空白组+Cy;⑦齐墩果酸组+Cy;⑧低剂量IgG组+Cy;⑨中剂量IgG组+Cy;⑩高剂量IgG组+Cy。③⑧、④⑨、⑤⑩组灌胃剂量分别为45、90、180mg/kgBW,②⑦组灌胃剂量为36mg/kgBW,①⑥组用等体积的生理盐水灌胃。在试验第3天和第6天分别给各模型组小鼠腹腔注射Cy 75mg/kgBW。于末次给药后次日,称重,眼眶采血并分离血清,颈动脉放血处死小鼠,取脾脏、胸腺称重,分别计算脾脏指数、胸腺指数;测定小鼠血清中IgG,白蛋白,球蛋白,总蛋白和免疫球蛋白的含量。结果表明:（1）试验动物经Cy处理后,脾脏和胸腺均明显萎缩,均小于正常空白组,三种剂量的IgG对此有显著的保护作用（P<0.05）,且呈现一定的剂量-效应关系,综合考虑生产成本以低剂量为宜。（2）与正常空白组相比,灌胃IgG后对Cy所致动物迟发型超敏反应（Delayed type of hypersensitivity,DTH）低下有显著的对抗作用（P<0.05）,但与模型组相比差异不显著（P>0.05）。（3）与正常空白组相比,灌胃提取的IgG能对抗由Cy所致的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数的降低,但差异不显著（P>0.05）,与模型空白组相比,中剂量IgG组能显著对抗由Cy所致的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率的降低（P<0.05）,但对吞噬指数差异不显著（P>0.05）,均未呈现剂量-效应关系。（4）灌胃IgG后能显著增加小鼠血清中IgG的含量,与正常空白组相比达显著水平（P<0.05）,尤其以高剂量效果最明显;与模型空白组相比,灌胃IgG后小鼠血清中的IgG含量增加,但差异不显著（P>0.05）,且呈现剂量-效应关系,说明提取的IgG在达到一定剂量时可以不同程度的增强小白鼠体液免疫能力,并可显著对抗由Cy引起的小鼠血清中IgG含量的降低（P<0.05）。（5）与正常空白组相比,灌胃IgG能显著提高小鼠血清中免疫球蛋白的含量（P<0.05）,但未呈现剂量-效应关系;与模型空白组相比,灌胃IgG后小鼠血清中的IgG含量增加,但差异不显著（P>0.05）,也未呈现剂量-效应关系。（6）与正常空白组相比,灌胃IgG后小鼠血清中球蛋白的含量显著升高（P<0.05）,但未呈现剂量-效应关系,与模型空白组相比差异不显著（P>0.05）。试验四:选用健康的SPF级昆明种小鼠80只,雌雄各半,体重18±2g,分为2个处理组,每组40只:①空白对照组;②自制IgG试验组。于试验第1天给②组小白鼠一次性灌胃10g/kgBW自制IgG后,连续观察15天,每周空腹称重一次,并记录小白鼠的死亡情况。结果表明:试验组小白鼠的体增重显著高于对照组,试验期间小鼠无一死亡,证明提取的IgG是无毒的。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第1章 绪论
  • 1.1 免疫球蛋白的结构
  • 1.2 免疫球蛋白的分类和生理功能
  • 1.2.1 IgG
  • 1.2.2 IgM
  • 1.2.3 IgA
  • 1.2.4 IgE 和IgD
  • 1.3 免疫球蛋白在动物生产中的应用
  • 1.3.1 免疫球蛋白在仔猪等仔畜代乳料中的应用
  • 1.3.2 免疫球蛋白在防治疾病和腹泻方面的应用
  • 1.3.3 免疫球蛋白在人的医药和保健食品当中的应用
  • 1.4 猪血资源的应用现状
  • 1.5 免疫球蛋白制备技术的研究进展
  • 1.5.1 盐析法
  • 1.5.2 超滤法
  • 1.5.3 有机溶剂提取法
  • 1.5.4 层析法
  • 1.6 本课题立题依据和研究目的
  • 第2章 免疫球蛋白提取方法的确定
  • 2.1 材料和方法
  • 2.1.1 试验材料
  • 2.1.2 试验设计
  • 2.1.3 检测指标
  • 2.1.4 数据分析
  • 2.2 结果与分析
  • 2.2.1 猪血浆的相关成分
  • 2.2.2 两种不同方法的提取效果
  • 2.3 讨论
  • 2.4 小结
  • 第3章 饱和硫酸铵盐析法提取 IgG 最佳参数的研究
  • 3.1 材料和方法
  • 3.1.1 试验材料
  • 3.1.2 试验设计
  • 3.1.3 试验方法
  • 3.1.4 检测指标
  • 3.1.5 数据分析
  • 3.2 结果与分析
  • 3.2.1 单因素试验
  • 3.2.2 猪血浆IgG 提取参数的正交试验设计
  • 3.2.3 最佳工艺的验证试验
  • 3.3 讨论
  • 3.4 小结
  • 第4章 IgG 对小白鼠免疫功能影响的研究
  • 4.1 材料与方法
  • 4.1.1 试验样品
  • 4.1.2 试验动物
  • 4.1.3 主要试剂
  • 4.1.4 其它试剂的配制
  • 4.1.5 主要仪器
  • 4.1.6 试验设计
  • 4.1.7 试验方法
  • 4.2 数据处理
  • 4.3 结果与分析
  • 4.3.1 对小白鼠免疫器官重量指数的影响
  • 4.3.2 对小白鼠细胞免疫的影响
  • 4.3.3 对小白鼠体液免疫的影响
  • 4.4 讨论
  • 4.4.1 Cy 对免疫抑制模型的影响
  • 4.4.2 IgG 对小白鼠脏器指数的影响
  • 4.4.3 IgG 对小白鼠DTH 的影响
  • 4.4.4 IgG 对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
  • 4.4.5 IgG 对小白鼠血清指标的影响
  • 4.5 小结
  • 第5章 IgG 对小白鼠急性毒性试验的研究
  • 5.1 材料与方法
  • 5.1.1 试验样品
  • 5.1.2 试验动物
  • 5.1.3 试验设计
  • 5.2 数据处理
  • 5.3 结果与分析
  • 5.4 讨论
  • 5.5 小结
  • 第6章 结论与建议
  • 6.1 本研究的总体结论
  • 6.2 本研究的创新之处
  • 6.3 有待于进一步解决的问题
  • 参考文献
  • 致谢
  • 附录A
  • 攻读学位期间的研究成果

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