论文摘要
目的:观察大鼠视网膜光损伤的病理形态、电生理、生化及凋亡相关指标的改变;探讨中药灵杞黄斑颗粒复方对大鼠视网膜光损伤的保护作用及其机制。方法:1.建立大鼠视网膜光损伤模型,研究灵杞黄斑颗粒对光损伤大鼠视网膜病理形态和视功能的保护作用。采用自制光损伤箱,白色荧光灯,光照强度平均为2800±150Lux,持续照射5小时建立大鼠视网膜光损伤模型。随机分为空白对照组、光损伤给水组和光损伤给药组。于造模前10天开始给予灵杞黄斑颗粒或蒸馏水灌胃,每日一次,至实验结束。光照后7天取眼球行病理切片检测,HE染色,光照后14天,进行视网膜电图（ERG）的检测、视网膜病理切片检测及视网膜外核层计数;按照上述方法,在光照后3天取眼球进行电镜观察,在第5天,10天取大鼠眼球,做石蜡切片,进行HE染色,观察形态改变;2.光照后3天,取眼球进行视网膜电镜检测,做石蜡切片,进行凋亡原位检测（TUNEL）标记细胞凋亡;3.测定光照后1天各组大鼠视网膜SOD、GSH-Px、CAT活性及MDA含量变化;4.使用高效液相色谱仪测定光照后14天各组视网膜游离氨基酸的变化;5.通过实时荧光定量PCR和免疫蛋白印迹（western blot）分析大鼠视网膜光损伤凋亡信号转导分子的转录表达;6.运用免疫组化方法观察光照后14天大鼠视网膜GFAP表达的变化。结果:1.成功建立大鼠视网膜光损伤模型,光照后7天和14天HE染色形态观察显示,光损伤给药组视网膜形态保存较完整,光照后14天,外核层计数显著多于光损伤给水组。光照后14天ERG检测表明,光损伤给水组大鼠视功能显著下降,光损伤给药组a、b波振幅及OPs波总振幅明显高于光损伤给水组。2.光照后3天电镜结果显示,光损伤给水组视网膜色素上皮细胞欠完整,微绒毛消失,光感受器外段紊乱,断裂甚至消失,外核层细胞核固缩,细胞间隙增宽,呈凋亡形态改变;而光损伤给药组形态相对完好,感受器外段排列相对规整,外核层有少量空泡变,仅见散在固缩的凋亡细胞核。TUNEL结果发现,光照后3天视网膜外核层出现大量阳性着染细胞核,而光损伤给药组仅见散在的少量黄色TUNEL阳性着色的感光细胞核。3.光照后1天,与光损伤给水组比较,光损伤给药组大鼠视网膜SOD、GSH-Px、CAT活性显著增高,MDA含量明显降低。4.光照后14天,大鼠视网膜天谷氨酸（Glu）、天门冬氨酸（Asp）、甘氨酸（Gly）、牛磺酸（Tau）、γ-氨基丁酸（GABA）含量增高,与光损伤给水组比较,光损伤给药组视网膜氨基酸含量显著降低。5.光照后,光损伤给水组c-fos、caspase-3 mRNA和蛋白表达上调,显著高于光损伤给药组,而bcl-xL mRNA和蛋白表达下调,光损伤给药组表达显著高于给水组。6.光照后14 d,光损伤给水组GFAP表达增高,光损伤给药组表达相对较低。结论:1.灵杞黄斑颗粒对光损伤大鼠视网膜形态、功能具有保护作用。2.灵杞黄斑颗粒能够明显减轻光照引起的视网膜氧化应激损伤,发挥其抗氧化作用;调控视网膜氨基酸类神经递质的异常,改善视网膜神经组织细胞的生物循环与代谢。3.灵杞黄斑颗粒通过下调c-fos、caspase-3表达,上调bcl-xL表达,抑制GFAP表达,显著抑制光损伤引起的感光细胞凋亡和神经胶质细胞增生。