苦参碱对U937细胞增殖抑制和诱导凋亡作用研究

论文摘要

研究背景及目的:淋巴瘤是人类常见的恶性肿瘤,U937细胞是目前大量应用于基础研究的淋巴瘤细胞株。淋巴瘤的治疗仍以化疗为主,主要药物包括阿霉素、环磷酰胺、长春新碱和放线菌D等,因选择性较差,毒副作用较大,对正常机体免疫与造血系统有较大的损害,长期大剂量应用受到限制。所以,寻找选择性高和毒副作用小的药物是目前提高临床疗效的重要途径。苦参碱（Matrine,Mat,C15 H24N20）是豆科槐属植物苦参或平科植物广豆根中分离出来的一种生物碱,盛产于我国西部地区。近年来,Mat体内外抗肿瘤活性受到极大关注,有研究报道Mat对肿瘤细胞有抑制增殖和促进凋亡作用,但国内外尚无Mat对U937细胞作用的相关研究。本实验拟①观察Mat对体外培养的人组织淋巴瘤细胞U937及人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）的形态学变化、乳酸脱氢酶活性改变、细胞周期影响,探讨Mat是否对U937细胞具有增殖抑制增殖抑制效应;②观察Mat对HUVECs的毒副作用;③观察Mat作用U937细胞后形态学改变、凋亡率及Bcl-2 mRNA的表达变化,探讨Mat对U937细胞凋亡作用的影响,并对其作用机制进行初步研究。方法:1.采用倒置显微镜、台盼蓝拒染法、四甲基偶氮唑盐（MTT）法、细胞培养液中乳酸脱氢酶活性测定、流式细胞术（FCM）,研究Mat体外对U937细胞和HUVECs增殖影响及其与细胞周期调控的关系。2.观察经Mat诱导后U937细胞形态学改变（包括核浆成熟情况、核浆比例、细胞直径、细胞体积、细胞器及特殊物质形成等）。3.Annexin V-FITC双染法显示经Mat诱导后U937细胞凋亡率。4.琼脂糖凝胶电泳法检测经Mat诱导后U937细胞凋亡的生物化学特征。5.RT-PCR检测经Mat诱导后U937细胞Bcl-2基因表达情况。结果:1.Mat（0.2 mg/ml～1.0mg/ml）作用1d、2d、3d、4d、5d后对U937细胞均有增殖抑制作用,在该浓度范围内呈剂量和时间依赖性,其半数抑制浓度为0.4mg/ml,有效作用时间为1d; Ma（t0.1 mg/ml～1.0mg/ml）作用1d、2d、3d、4d、5d后对HUVECs无明显增殖抑制作用,亦无剂量和时间依赖性;2.Mat（0.2 mg/ml～1.0mg/ml）作用U937细胞48h后,S期细胞比例增加,细胞发生S期阻滞;对HUVECs细胞周期无明显影响;3. 0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml Mat均可使U937细胞核浆比例下降,染色质边集,出现凋亡小体,随Mat浓度增加细胞形态学改变越明显。4.AnnexinV-FITC双染法显示Ma（t0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml）作用U937细胞72h后细胞凋亡率分别为3.25%、5.32%、8.17%、11.20%、16.05%、22.25%、28.58%,与U937细胞对照组（1.84%）及Mat 0.1mg/ml组（1.95%）比较差异有统计学意义;琼脂糖凝胶电泳法（agarose gel electrophoresis,AGE）显示0.3～1.0mg/ml Mat作用U937细胞72h后凋亡细胞可形成明显的DNA梯度。5.RT-PCR检测结果显示U937细胞经Ma（t0.2 mg/ml～1.0mg/ml）作用72h后Bcl-2 mRNA表达明显减弱,随剂量增加表达减弱越明显。结论:1.Mat在一定浓度和时间对U937细胞具有增殖抑制作用,呈量-效和时-效依赖关系;2.Mat对U937细胞具有细胞毒性作用,呈量-效和时-效依赖关系;3.Mat能影响U937细胞的细胞周期分布,下调c-myc的表达,抑制肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡;4.Mat在一定浓度和时间不能抑制HUVECs增殖,对其细胞周期亦无明显影响。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 苦参碱对 U937 细胞的增殖抑制作用研究
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二部分 苦参碱对 U937 细胞的凋亡作用研究
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文小结
• 文献综述一
• 文献综述二
• 致谢
• 攻读硕士学位期间撰写发表的论文