香蕉内生菌的分离、纯化及其防控香蕉枯萎病的初步研究

论文摘要

在香蕉尖孢镰刀菌引起的真菌性香蕉枯萎病肆虐的一个多世纪以来,前人做了无数的研究,但是该病至今仍被认为是香蕉的“癌症”。各种防控香蕉枯萎病的手段层出不穷.将这些防控手段合理的结合起来进行综合防控才是最终解决香蕉枯萎病的必由之路。生物防控是香蕉枯萎病综合防治的重要一环,而香蕉内生菌在防控香蕉枯萎病中有无法替代的优势——无定殖障碍,而内生菌中的枯草芽孢杆菌以其独特的生理优势更是具有巨大的生防潜力。本文以香蕉枯萎病疫区健康香蕉吸芽组织培养苗中的污染袋装苗为材料,进行内生菌的分离与纯化,从1461袋香蕉组培苗,经分离纯化得到2482株原始菌株,经过菌落形态观察初步将其分为三类,其中真菌218株,细菌2196侏,放线菌为68株,经逐步筛选得到35株对尖孢镰刀菌有较强拮抗效果的内生菌。将其中的2株香蕉枯萎病拮抗细菌0202-2和1112分别涂布于含有不同浓度的利福平培养基上,筛选出抗药性突变标记细菌0202-2-R（简称Rl菌株）和1112-R（简称R2菌株）。将香蕉枯萎病菌接种于香蕉植株根部,1d后再将抗药性标记的拮抗细菌R1和R2接种。在不同时间测定拮抗细菌在根际、根内、球茎和假茎的定殖情况。结果显不：1、将拮抗细菌接种香蕉根部1-3 d后,在植株根际土壤内存在大量拮抗细菌,而根内、球茎和假茎内存在少量拮抗细菌：2、接种后7-14 d,在植株根内、球茎和假茎内定殖的拮抗细菌增多,并达到最大量；3、在接种后14-21 d,于植株根内、球茎和假茎内定殖的拮抗细菌量急剧下降；4、在接种28-35d于植株根内、球茎和假茎内定殖的拮抗细菌量稍有回升。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 序言
• 1.1 我国香蕉产业现状
• 1.2 香蕉真菌性枯萎病概述
• 1.2.1 发病情况及危害
• 1.2.2 发病因素及特点
• 1.2.3 传统防控措施
• 1.2.3.1 种苗检疫和管理
• 1.2.3.2 清除病株
• 1.2.3.3 农业防治
• 1.2.3.4 化学防治
• 1.2.4 国内外的解决方法
• 1.2.5 香蕉枯萎病生防微生物产品功效的限制因子
• 1.3 枯萎病的生物防治研究进展
• 1.3.1 真菌
• 1.3.1.1 木霉（Trichodermaspp）
• 1.3.1.2 菌根
• 1.3.1.3 其它真菌
• 1.3.2 细菌
• 1.3.2.1 芽孢杆菌
• 1.3.2.2 假单孢杆菌
• 1.3.3 放线菌
• 1.3.4 拮抗香蕉枯萎病菌的其它菌株
• 1.3.5 枯萎病的综合防治措施
• 1.3.5.1 生防微生物与不同品种植物结合
• 1.3.5.2 生防微生物与不同药剂、营养物结合
• 1.3.5.3 不同生防微生物相互结合
• 1.4 本实验的立题依据
• 1.4.1 选用内生菌作为生防菌的意义
• 1.4.2 内生细菌与寄主植物的关系
• 1.4.3 在香蕉枯萎病综合防控中的意义
• 2 实验材料与方法
• 2.1 内生菌的分离与纯化
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 分离材料的选取
• 2.1.3 方法
• 2.1.3.1 内生菌的分离
• 2.1.3.2 纯化
• 2.1.3.3 保存
• 2.2 活性菌株的筛选
• 2.2.1 尖孢镰刀菌（Foc4）的活化
• 2.2.2 病原菌鉴定
• 2.2.3 平板对峙
• 2.2.3.4 尖孢镰刀菌（Foc4）靶标平板制备
• 2.2.3.5 菌种活化
• 2.2.3.6 待筛菌的接种
• 2.2.4 初筛
• 2.2.5 第一次复筛
• 2.2.6 第二次复筛
• 2.2.7 第三次复筛
• 2.2.7.1 阳性对照的筛选
• 2.2.7.2 介质法
• 2.2.7.3 第三次复筛
• 2.3 活性菌株的鉴定
• 2.3.1 活性菌株基因组DNA的提取
• 2.3.1.1 菌种活化
• 2.3.1.2 菌种接种
• 2.3.1.3 培养
• 2.3.1.4 抽提DNA
• 2.3.2 16S rDNA片段扩增
• 2.3.3 PCR产物的凝胶电泳
• 2.3.4 目标片段回收
• 2.3.5 回收片段检测
• 2.3.6 测序
• 2.4 盆栽试验
• 2.4.1 材料与方法
• 2.4.1.1 供试材料
• 2.4.1.2 方法
• 3 实验结果与分析
• 3.1 菌株的分离结果
• 3.2 尖孢镰刀菌的生长状态初步鉴定
• 3.3 抗尖孢镰刀菌活性菌株的筛选
• 3.3.1 初筛
• 3.3.1.1 初筛结果
• 3.3.1.2 初筛结果分析
• 3.3.2 第一次复筛
• 3.3.3 第二次复筛
• 3.3.4 第三次复筛
• 3.3.4.1 阳性对照的筛选
• 3.3.4.2 第三次复筛
• 3.4 菌株筛选小结
• 3.5 活性菌株16S rDNA的测定
• 3.6 活性菌株基本性质测定
• 3.7 抗性标记
• 3.7.1 供试菌的天然抗药性
• 3.7.2 供试菌株的室内拮抗活性
• 3.7.3 土壤微生物在Rif抗性培养基上的适应性
• 3.7.4 标记菌在香蕉根际土壤中的消长动态
• 3.7.4.1 标记菌在香蕉根内的定殖及消长动态
• 3.7.4.2 标记菌在香蕉球茎内的定殖及消长动态
• 3.7.4.3 标记菌在香蕉根假茎内的定殖及消长动态
• 3.7.5 发病情况统计
• 3.8 盆栽试验小结
• 4 讨论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 后记