ZNF268两个新转录本的克隆及功能分析

论文摘要

ZNF268基因是我们在以构建早期人胚胎cDNA文库的基础上,从3-5周龄人胚胎cDNA文库中得到一个典型的Cys2/His2型锌指基因。在早期的研究中,我们采用NORTHERN BLOT及WESTERN BLOT等技术研究表明ZNF268主要在胚胎分化发育早期表达;实验研究表明ZNF268特异性表达在胚胎肝脏中。 为了进一步研究ZNF268的蛋白质表达情况,我们利用已有的ZNF268特异性抗体paZNF268ab,运用免疫组织化学方法对3-5周龄的人胚胎进行检测时,发现ZNF268在3周龄人胚卵黄囊中的“血岛”细胞上有表达;在5周龄人胚心腔中的游离细胞上有表达,在5周龄人胚肝血窦中的游离细胞上也有表达。同时利用CD34和CD38单克隆抗体采用免疫组化的方法证明这些表达了ZNF268蛋白质的细胞类型,结果显示,CD34抗体反应呈现阳性,CD38抗体反应呈现阴性,一般认为具有CD34,没有CD38为血干/祖细胞的标志,因此可以认为这些细胞为血干/祖细胞。锌指蛋白通过识别同源的DNA识别位点,结合转录调控因子,会在细胞的分化和发育的过程中特异的表达。所以蛋白质的表达可以作为预测一个新的锌指蛋白功能的重要线索。推测ZNF268也可能参与早期造血细胞的分化发育,从而与早期人胚胎造血相关。 我们采用RT-PCR的方法,调查了ZNF268基因在成人血液中的表达。我们选取20例正常成人的全血用TRIZOL分别提取总RNA,随

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 锌指蛋白的分子生物学及ZNF268的分子生物学特性
• 1.1 前言
• 1.2 锌指蛋白的发现和命名
• 1.2.1 锌指蛋白的发现
• 1.2.2 锌指蛋白的命名
• 1.3 锌指蛋白的分类
• 2H₂型锌指蛋白的分子生物学特征'>1.4 C₂H₂型锌指蛋白的分子生物学特征
• 2H₂型锌指蛋白中的锌指基序'>1.4.1 C₂H₂型锌指蛋白中的锌指基序
• 1.4.2 锌指结构域的核酸识别特异性
• 2H₂型锌指蛋白中存在的其它保守结构'>1.4.3 C₂H₂型锌指蛋白中存在的其它保守结构
• 2H₂型锌指蛋白的生物学功能'>1.5 C₂H₂型锌指蛋白的生物学功能
• 2H₂型锌指蛋白'>1.5.1 参与细胞分化的C₂H₂型锌指蛋白
• 2H₂型锌指蛋白'>1.5.2 参与胚胎发育的C₂H₂型锌指蛋白
• 2H₂型锌指蛋白'>1.5.3 与疾病相关的C₂H₂型锌指蛋白
• 2H₂型锌指蛋白的其它特性'>1.6 C₂H₂型锌指蛋白的其它特性
• 2H₂型锌指蛋白的多种转录本形式'>1.6.1 C₂H₂型锌指蛋白的多种转录本形式
• 2H₂型锌指蛋白在染色体上成簇分布与其功能的关系'>1.6.2 C₂H₂型锌指蛋白在染色体上成簇分布与其功能的关系
• 2H₂型锌指蛋白与进化'>1.6.3 C₂H₂型锌指蛋白与进化
• 1.7 ZNF268的分子生物学特征
• 1.7.1 早期人胚cDNA文库的构建和ZNF268基因的获得
• 1.7.2 ZNF268全长cDNA克隆及序列分析
• 1.7.3 ZNF268转录本的克隆和分析
• 1.7.4 ZNF268基因组结构分析
• 1.7.5 ZNF268 mRNA表达分析
• 1.8 ZNF268蛋白质表达分析
• 1.9 小结
• 第二章 ZNF268蛋白质表达分析
• 2.1 前言
• 2.2 材料
• 2.2.1 组织材料
• 2.2.2 免疫组织化学用试剂
• 2.3 方法
• 2.3.1 固定、脱水、透明、浸蜡、包埋
• 2.3.2 切片、展片、烤片
• 2.3.3 脱腊、入水，常规染色、透明、封片
• 2.3.4 免疫组化
• 2.3.5 免疫组化方法鉴定细胞类型
• 2.4 ZNF268蛋白在人造血干/祖细胞中的表达结果
• 2.5 讨论
• 第三章 ZNF268的新的转录本的鉴定，克隆和测序及序列分析
• 3.1 前言
• 3.2 材料
• 3.1.1 菌株和载体
• 3.2.2 标本
• 3.2.3 主要的试剂
• 3.2.4 主要仪器
• 3.2.5 主要溶液
• 3.2.6 数据库及分子生物学软件
• 3.3 方法
• 3.3.1 电转化大肠杆菌细胞的制备
• 3.3.2 人血总RNA的提取（TRIZOL一步法）
• 3.3.3 逆转录反应
• 3.3.5 高压电穿孔法转化大肠杆菌
• 3.3.6 阳性克隆子的鉴定
• 3.3.7 测序产物的生物信息学分析
• 3.4 结果与分析
• 3.4.1 正常人全血的总RNA的提取
• 3.4.2 PCR扩增
• 3.4.3 巢式PCR扩增
• 3.4.4 ZNF268不同转录本的克隆
• 3.5 讨论
• 参考文献
• 本研究工作的创新点
• 研究期间发表的论文
• 致谢